尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株nclh446增殖的抑制作用论文

《尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株nclh446增殖的抑制作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCLH446增殖的抑制作用论文刘英杰，马远方，刘广超，吴雄文【摘要】目的研究尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCLH446增殖的抑制作用,为临床治疗提供实验室依据。方法常规培养人小细胞肺癌细胞株NCLH446，MTT法检测尼美舒利的细胞毒性作用；倒置显微镜与Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化；流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。结果MTT显示尼美舒利呈剂量与时间依赖性抑制人小细胞肺癌细胞株NCLH446的增殖；倒置显微镜下可见细胞变小、变圆、皱缩、部分细胞脱落飘浮于培养基中。荧光显微镜下可见细胞核染色质致密浓缩、荧光强度增强、染色质边集、核破碎

2、，凋亡小体形成等。FCM检测结果表明尼美舒利既可诱导NCLH446细胞凋亡，又可引起坏死，400μmol/L的尼美舒利作用细胞24h后.freelesulideonProliferationofHumanSmallCellLungCancerCellLineNCLH446Keyansmallcelllungcancer;CelllineNCLH446；Nimesulide；Apoptosis近年来,选择性环氧化酶2抑制剂的抗肿瘤作用日益引起重视，尼美舒利（Nimesulide）是一种人工合成的环氧化酶2特异性抑制剂,其对人小细胞肺癌细胞株NCLH446有无抑制作用国内外文献未见报道

3、，本研究旨在通过MTT、倒置显微镜与荧光显微镜,流式细胞仪等实验方法观察尼美舒利体外对人NCLH446细胞株的抑制作用,为临床小细胞肺癌的治疗提供实验室依据。1材料与方法1.1材料人小细胞肺癌细胞株NCLH446购自中国科学院细胞库，尼美舒利购自Cayman公司；RPMI1640培养基、胎牛血清为TBD公司产品；MTT为sigma公司产品。FITCAnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒为BD公司产品。1.2方法1.2.1MTT法细胞毒性分析将对数生长期NCLH446细胞制备成5×104/ml的细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔200μl,于37℃,5%CO2的培养箱中培养，24h后

4、换为含有不同浓度尼美舒利(0.78125、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800μmol/L)的培养液，对照组以正常培养液替代尼美舒利,每孔200μl，分别培养24、36、48、60、72h,更换不含药物的培养液200μl/孔，并加入0.5%MTT20μl/孔，继续培养4h，弃上清，每孔加入150μlDMSO,.freelin，全自动酶标仪(ThermoMultiskanAscent)测OD570吸收值。每一浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞抑制率=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。1.2.2细胞凋亡形态学观察在6孔板中放入盖玻片，加入

5、含NCLH446细胞的164010培养液，细胞密度为3×105/ml，2ml/孔，置37℃，5%CO2培养24h，弃去培养液，加入含400μmol/L尼美舒利的164010培养液2ml/孔，对照孔仍用正常培养液。置37℃、5%CO2培养24h。倒置显微镜下观察细胞形态变化，将盖玻片取出，用PBS洗后，丙酮固定5min，再用PBS洗，Hoechst33258染色10min，水洗，甘油封片，在荧光显微镜下观察细胞核形态变化并拍照。1.2.3流式细胞仪检测NCLH446细胞凋亡率收集并制备NCLH446细胞悬液，加入24孔培养板，1ml/孔，细胞密度为105/孔，置37℃，5%CO2培养2

6、4h，把培养液换为含400μmol/L尼美舒利的164010，空白孔及对照孔仍用正常培养液，置37℃，5%CO2温箱培养24h，收集细胞于小离心管中离心，用标记液洗一次，每孔细胞悬浮于100μl标记液中，加FITCAnnexinⅤ溶液及PI染液各5μl，混匀后避光室温放置15min，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Cellquest软件分析。2结果2.1MTT法尼美舒利对NCLH446细胞的毒性作用MTT结果显示尼美舒利对NCLH446细胞的体外增殖有较强的抑制作用，且存在时间和剂量依赖性。当尼美舒利浓度在25μmol/L以下时，其对NCLH446细胞的抑制作用不明显，见图1、2。2.

7、2细胞凋亡形态学观察倒置显微镜下观察：在正常培养情况下NCLH446细胞生长良好,形态为多角形透明、折光性好、细胞铺展良好；经尼美舒利处理后,细胞变小、变圆、皱缩、部分细胞脱落飘浮于培养基中，并随尼美舒利作用时间的延长其飘浮细胞也增多。凋亡细胞荧光染色：400μmol/L尼美舒利作用24h后的NCLH446细胞染色质浓缩、荧光强度增强、染色质边集、核破碎等细胞凋亡形态特征明显。而阴性对照细胞染