浙江汉族人群线粒体dna nd1基因g3316a突变与2型糖尿病论文

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1、浙江汉族人群线粒体DNAND1基因G3316A突变与2型糖尿病论文郦卫星，华燕吟，吕建新【摘要】目的：研究与日本人2型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)相关的线粒体DNA(mitochondriaDNA，mtDNA)ND1基因G3316A突变在浙江汉族T2DM人群中的发生率及其临床意义。方法：采用PCR产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315名T2DM患者及158名正常对照的外周血mtDNA进行检测，并用DNASTAR和Antheprot5.0软件分析突变位点。结果：在T2DM患者中检测到6例(占1.90%)G331

2、6A突变，对照组中发现3例(占1.90%)突变，突变发生率在两组间差异无显著性(P0.05)。携带G3316A位点突变的T2DM组与无该突变的T2DM组之间的临床特点(发病年龄、体重指数和血糖水平等)比较差异亦无显著性。蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲的构成比没有发生改变。结论：线粒体DNAND1基因G3316A突变可能与浙江汉族人群T2DM的发生无关.freelutationmitochondriaDNA(mtDNA)NADHdehydrogenasesubunit1(ND1)genepointG3316Aassociatedel

3、litus(T2DM)inChineseHanNationaliytpopulationinZhejiangprovince.Methods:DirectsequencingofPCRproductsutationinbloodcorpusclemtDNAin315T2DMpatientsalcontrolsfromZhejiangprovince.ThemutationutationutationhadnodifferentbetutationandthoseutationorphismofmtDNAandunrelatedtothepathogene

4、sisofT2DMinZhejiangHanpopulation.Keyellitus，type2;mitochondrialDNA;mutation;polymorphism分子遗传学研究表明，某些2型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)的发生与线粒体基因(mitochondriaDNA，mtDNA)突变有关，因此mtDNA突变型糖尿病逐渐引起人们的重视。目前，已经有许多学者对不同种族及不同地区的T2DM患者进行mtDNA相关性研究，发现某些mtDNA点突变在不同地区T2DM患者中的发生率不同，与该病的发病关系也不尽相同，可能

5、与其发病相关，也可能仅为正常的多态性。为了解国内外学者广为关注的mtDNAG3316A突变与浙江汉族人群T2DM发病之间的关系，我们进行了以下研究。1对象和方法1.1对象病例组为随机选取浙江籍汉族人，根据1997年的住院患者315例，男166例，女149例，年龄(55.6±12.5)岁，患者间无血缘关系;正常对照组为年龄匹配的健康体检者158名，男85例，女73例，均为浙江籍汉族人，无高血压、高脂血症、脑血管病、糖尿病及家族史等。两组间年龄、性别和体重指数差异无显著性(均P0.05)。1.2方法1.2.1主要仪器和试剂：①试剂：DNAExtrac-tio

6、n试剂盒、高保真TaqDNAPolymerase和DNAPurification试剂，均购自TaKaRa公司(Japan);测序试剂盒购自Beckman公司(USA)。②仪器：BECKMANCOULTERCEQ8800测序仪(Beckman公司，USA)，MyCyclerThermalCycler170-9703PCR扩增仪(BIO-RAD公司，USA)。1.2.2PCR扩增和测序：用DNAExtraction试剂盒提取外周血细胞DNA。PCR扩增上游引物为5’-TTCACAAAGCGCCTTCCCCC-3’，下游引物为5’-GCGATGGTGAGAGC

7、TAAGGTC-3’。由上海生工公司合成(PAGE级纯化，纯度≥99%)。PCR循环参数：94℃预变性5min，95℃变性1min，58℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环，72℃再延伸5min。扩增产物长399bp，用1.5%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增片段。将上述PCR产物用TaKaRaDNAPurification试剂盒纯化后，用BECKMANCOULTERCEQ8800测序仪直接测序，机器自动记录测序结果。用DNASTAR软件包进行序列分析，与标准序列比对。若发现有G3316A突变的标本则同时进行反向测序，两者结果相吻合则证明突变结果可靠

8、。1.3统计学处理方法计量资料采用t检验;计数资料采用x2检验及Fisher精确