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1、第22卷第6期 2003年11月无锡轻工大学学报 JournalofWuxiUniversityofLightIndustryVol.22 No.6Nov. 2003 文章编号:10092038X(2003)0620001204耐热β2半乳糖苷酶基因bgaB在枯草芽孢杆菌中的整合表达张灏, 夏雨, 傅晓燕, 陈卫, 丁霄霖(江南大学食品学院,江苏无锡214036)摘 要:来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillusstearothermophilus的耐热β2半乳糖苷酶基因bgaB被克隆到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中,然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆
2、到枯草芽胞杆菌整合载体pSAS144中,转化Bacillussubtilis受体菌BD170,在5μg/mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子.经摇瓶发酵后,得到耐热乳糖酶的比酶活为0.32U/mg,是出发菌株比酶活的2倍.关键词:耐热β2半乳糖苷酶;枯草芽孢杆菌;整合表达中图分类号:Q78文献标识码:AIntegrationandExpressionofaThermostableβ2galactosidaseGenebgaBinBacillussubtilisZHANGHao, XIAYu, FUXiao2yan, CHENWei, DINGXiao2lin(SchoolofFood
3、ScienceandTechnology,SouthernYangtzeUniversity,Wuxi214036,China)Abstract:Thethermostablebeta2galactosidasegenebgaBfromBacillusstearothermophiluswascloned
intoE.coli2B.subtilis.shuttlevectorpMA5.ThenbgaBgeneanditsregulatorysequencewere
subclonedtoB.subtilis.integrativevectorpSAS144andformedanewi
4、ntegrativevectorpSAS1442bgaB.Thisvectorwasthentransformedtoachloramphenicol.SensitivehostB.subtilisBD170andthetransformantswerereceivedonLBagarmediumwithchloramphenicoltoafinalconcentrationof5μg/mL.Theintegrativestrainshowedthermostable2galactosidaseactivityof0.32U/mg,twiceofthatfromoriginalstr
5、ainBacillusstearothermophilus.Keywords:thermostablebeta2galactosidase;Bacillussubtilis;integrationandexpression β2半乳糖苷酶(EC2.3.1.23)俗称乳糖酶,能热稳定性较差,是一种常温水解酶,而来源于嗜热将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,工业上可用于生产细菌和霉菌的乳糖酶热稳定性较好.来源于嗜热脂低乳糖牛奶.来源不同的乳糖酶理化性质有很大差肪芽胞杆菌(Bacillusstearothermophilus)的乳糖酶别,其中之一就是热稳定性不同,例如酵母乳糖酶具有良好的热稳定性
6、,由该菌染色体基因bgaB编 收稿日期:2003206226; 修回日期:2003209210.作者简介:张灏(19622),男,江苏苏州人,副教授,工学硕士.©1994-2006ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net2 无 锡 轻 工 大 学 学 报 第22卷 码的乳糖酶,在70℃仍具有较高的稳定性[1].法见文献[6].本课题组已经从Bacillusstearothermophilus1.2.3 枯草芽孢杆菌的染色
7、体DNA提取 BD170染色体扩增得到编码耐热乳糖酶的bgaB基因,并整合菌株的染色体DNA提取方法见文献[7].
克隆到大肠杆菌表达系统中进行了表达研究[2].枯1.2.4 酶活测定方法 采用修改的Gist2Brocades
草芽胞杆菌表达体系广泛应用于酶制剂的工业生法[8],酶反应温度为55℃.酶活单位定义为1min产,与大肠杆菌表达体系相比具有许多优点,但含内水解底物ONPG产生ONP的微摩尔数.有外源基因的自主复制载体在枯草杆菌宿主中不1.2.5
