α-乙酰乳酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合型表达

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1、万方数据基因组学与应用生物学，2010年，第29卷，第5期，第843—848页GenoIIlics粕dAppliedBiolog)，，20lO，V01．29，No．5，843—848研究报告ALetter仪一乙酰乳酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合型表达廖东庆1。陈发忠-岳田芳-张云光·黄日波∞李晓明-+l广西南宁邦尔克生物技术有限责任公司，南宁，530003；2广西人学生命科学与技术学院，南宁，530005；3广西科学院，南宁，530003+通讯作者，】【1]nliOl24@鲫ail．com摘

2、要仅一乙酰乳酸脱羧酶在啤酒牛产中能加快啤酒成熟，有重要的应用价值。本研究将枯草芽孢杆菌启动子P43克隆到质粒pUCl9一ALDc中的仅一乙酰乳酸脱羧酶摹因之前，得到重组质粒pUCl9一P43一ALDC。重组质粒puCl9一P43一ALDC与质粒pMLK83一BN同源霞组，筛选得到枯草芽孢杆菌整合质粒pMLK83一ALDC。用此整合质粒转化枯草芽孢杆菌lA751，挑选出新霉索抗性且无淀粉酶活性的重组菌株。此菌株用LB培养基在37℃、220r／min摇瓶培养过夜，测得仅一乙酰乳酸脱羧酶活力为15．6

3、U／mL，说明整合的仅一乙酰乳酸脱羧酶基冈能够在重组菌株中稳定传代和表达。本研究首次在枯草芽孢杆菌中用整合型的方式重组表达了仅一乙酰乳酸脱羧酶，提出了一种有潜力的生产旷乙酰乳酸脱羧酶的新方法。关键词仪一乙酰乳酸脱羧酶，枯草芽孢杆菌，整合表达，同源霞组Inte伊atiVeExpressionof仅一acetolactateDecarboxylaseGenein日∞垅瑚T●Ts配6￡zZ如LiaoD0ngqing1’2ChenFazhong1YueTjan白ng1ZhangY．unguang1Hua

4、ng尉bo筇“Xiaoming1’1Gman黔iN蛐ingBiocl彻eBiotecllnolo甜C0．，圳．，N锄ing，530003；2CollegeofLifeScie眦e锄dTechnology，G啪弘iUnive倦i％Nanning，530005；3G啪黔iAcad锄y0fSciences，N缸ning，530003+C0rrespond她auth％xmliol24@舯ail．c蛐DOI：lO．3969／gab．029．000843Abstract仅一acetolactatedecar

5、boxylaseplaysanimponant印pliedroleinspeedingupthematumtionofbeeriIlbeerproduction．IIlthisstudyweobtainedtherecombinamplasmidpUC19一P43一ALDCbycloningpromoterP43of召位垅獬s配6脚话inthe劬mof仅一acetolactatedecarboxylasegeneinplaSmidpUCl9一ALDC，which、Ⅳasho—mologousre

6、combinatedwithplasmidpMlLK83一BNandobtainingtheintegrationplasmidpM[LK83一ALDCOf觑饥瑚sM6础括．T11enwetransfo肌edtheintegrationplasmidnoB0c删榔sM娩‰lA751，andselectedthere—combin觚ts打ainbyneomycillresistancescreeningandamylaseactiV毋negatiVescreening．AReroV锄iglltfl

7、ask-ingat37℃，220r／mininLBmedium，the仅一acetolactatedecarboxylaseactivitieswasl5．6U／mLwiththisstrain．Theintegrated仅一acetolactatedecarboxylasegenewouldbepassagedandexpressedstablyi11therecombin觚tstrain．Inthisstudy，wee)叩ressedrecombinaIIt仅一acetolactatedec

8、arboxylasegeneinte孕atedlyinBⅡc垅邯s曲磁括forthefirsttime，andproposedapotentiallynewwayofpmducing仅一acetolactatedecarboxylase．KeywordsQ—acetolactatedecarboxylase，曰0c班潞5Ⅱ6扰蠡，lIltegrativeexpression，HomologousrecombiIlation双乙酰(diacetyl)是啤酒发酵中的风味物质，但是啤酒中双乙酰含量超过