枯草芽孢杆菌培养基配方优化的研究

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1、万方数据《渔业现代化>2008年第35卷第6期枯草芽孢杆菌培养基配方优化的研究王妹1，陈有光2，段平3，段登选2，陈秀丽2，王育锋2(1上海海洋大!学’上海201306；2山东省淡水水产研究所，山东济南250117；3济宁市水文水资源勘测局，山东济宁272019)摘要：枯草芽孢杆菌培养基的组分是由葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙等5种原料构成，采用L，。(45)正交表，将5种原料作为枯草芽孢杆菌培养有影响的因素，通过试验数理统计的直观和理论分析，对其配方进行优化。试验结果表明，当培养基的配方为无水葡萄糖3．50g／

2、L、蛋白胨0．83g／L、酵母膏0．50g／L、磷酸二氢钾0．35g／L和碳酸钙0．25g／L，温度(34±2)℃时，培养16h即可达到生长峰值。由于枯草芽孢杆菌光学密度(opticaldensity，OD)与活茵数量的关系：Y=0．5182x2+1．4462x+1．9714(r=0．996343)，接种的枯草芽孢杆菌由1．9714×108cfufmL提高到3．3124×108cfu／mL。优化的枯草芽孢杆菌培养基条件能有效促进枯草芽孢杆菌生长。关键词：枯草芽孢杆菌；正交试验设计；培养基优化；平板计数法；水产养殖；水质净化在

3、水产上运用的芽孢杆菌主要是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis』，BS)，在水体或饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂，可以有效抑制或杀灭水体中或养殖生物体内的某些有害致病菌，并且能增强有益菌的群落，从而达到防治水产疾病的目的。1。3j。芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，可降解饲料中的某些抗营养因子，饲料转化率提高，促进鱼类生长，是一种绿色饲料添加剂，比其它益生菌具有更多的优点。4引。但在现今工业化生产中，常用发酵法，存在着周期长、芽孢形成率低、成本高等问题。6‘7J。因此，试验通过L，。(45)正交试验对枯草芽

4、孢杆菌培养基配方进行优化研究，以提高枯草芽孢杆菌的产量并降低生产成本，这对枯草芽孢杆菌的扩培、储存及使用，具有重要的指导意义。8。10I。1材料方法1．1试验菌种及培养基枯草芽孢杆菌由山东省医学科学院基础所微生物室保藏，菌种保藏编号ATCCNo．6051。通过扩大培养，制成菌悬液备用。液体培养基基础配方为：葡萄糖30．0g、蛋白胨10．0g、酵母膏5．0g、磷酸二氢钾4．5g、碳酸钙2．0g和无菌水1000mL。固体培养基(用于平板菌落计数)配方为：无水葡萄糖30．0g、蛋白胨10．0g、酵母膏5．0g、磷酸二氢钾4．5g、

5、碳酸钙2．0g和琼脂209，无菌水1000mL。1．2仪器与试剂主要仪器及其它器皿：紫外线分光光度计Cary100，振荡培养箱BS-IEA，显微镜OlympusCX41，蒸汽消毒器YXQG02，自控振荡机ZD，电子天平AG204；吸管、培养皿、玻璃涂棒、试管及试管架、三角烧瓶等常用实验室器皿。主要试剂：磷酸二氢钾、碳酸钙均为分析纯(AR)；葡萄糖、蛋白胨和琼脂均为生化试剂(BR)。1．3数理统计分析数据统计分析与图表处理采用SPSS16．0(StatisticalPackageforSocialScience)社会学统计软件

6、和Excel2003软件处理。对试验组数据采用方差分析(Analysis—of-Variance，ANOVA)来检验收稿日期：2008—10—21；修回丑期：2008．12—12基金项目：2004年山东省科技攻关计划项目《无公害、封闭式工厂化养鱼水处理系统设施》(2004GG2209134)；2008年山东省农业重大应用技术创新课题《淡水池塘节水生态高效养殖关键技术研究》(20080001)作者简介：王妹(1982一)，女，上海海洋大学生命科学与技术学院在读硕士，从事生态渔业研究。通讯作者：陈有光(1961一)，男，研究员，

7、从事水产养殖与设施渔业专业研究。E—mail：chenyouguan92000@yhoo．COrn．cn万方数据《渔业现代化)2008年第35卷第6期45各组之间的显著性，P<0．05为显著性水平，P<0．01为极显著性水平¨1。，并对4个水平作差值分析¨“。1．4液体培养基优化正交试验设计枯草芽孢杆菌生长受到多种因素的影响，根据数理统计原理，利用规格化的表格——L．。(45)正交表，合理安排试验，即分别安排16个试验组，每试验组3个重复，共48个测试样。接种后测试1次OD鸵。值(即光学密度值)，然后每隔8h测试1次OD。：

8、。值，连续5次。根据检测结果进行统计分析，筛选出枯草芽孢杆菌最佳培养基的配方¨川J。其正交试验方案见表1。表1液体培养基L。。(45)正交试验因素水平表Tab．】L16(45)orthogonaltestofliquidmediumg／L注：培养液1L。2试验结果2．1枯草芽孢杆菌OD。加