半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究论文

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1、半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究论文刘义龚先玲梁念慈【关键词】半边旗；,.freelorEffectsofSolubleponentsofPteris.semipnnataL.againstVariousTumorCellsAbstract：ObjectiveTostudytheantitumoreffectsofthesolubleponentsofPterissemipnnataL.(PsL)onvarioustumorcells.MethodsCellgroediatedbythesolubleponentsofPsLeasuredb

2、yMTTassayandTrypanBlueexclusion.ResultsTheeffectsofthesolubleponentsofPsLongroentorcells.KeyipnnataL;Solubleponents;Antitumor半边旗PterissemipnnataL.(PsL）是一种民间草药，属凤尾蕨科植物，性寒，具疏解风寒、化湿消味、消热解毒的功效。近年来我实验室的研究表明半边旗具有显著的体内外抗肿瘤作用［1~3］.freela公司；超级无支原体新生牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司；RPMI-1640购自美国Hyclone公司

3、；胰酶购自美国Gibco公司；其余试剂均为国产分析纯。人肝癌BLE-7402细胞、人肺腺癌A549细胞、人慢性粒细胞白血病细胞K562细胞由本室传代。1.2方法1.2.1半边旗水溶性成分的提取经CO2超临界萃取后半边旗残渣5g，加10倍量95%乙醇水浴回流，微沸1h，滤纸过滤，收集滤液；将滤渣再加10倍量95%乙醇，水浴回流微沸1h，滤纸过滤，得滤液。合并两次所得滤液，回收乙醇得浸膏，加50ml三蒸水，离心10min（2000r/min），取上清，制成浓度为100mg生药ml-1的溶液，过滤除菌备用。1.2.2细胞培养BLE-7402，A549，K562细

4、胞培养于含10%小牛血清，100kUL-1青霉素和100mgL-1链霉素的RPMI-1640培养液中，37℃、5%CO2饱和湿度细胞培养箱培养。取对数生长期细胞用于实验。1.2.3MTT法［6］取对数生长期的期BLE7402，A549细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，RPMI-1640完全培养液调制成5.0×104个ml-1细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种100μl（含5.0×103个细胞）。培养过夜后，吸出培养液，加入新培养液90μl及不同浓度的半边旗水溶性成分溶液10μl，使终浓度分别为1.25，1.75，2.50，5.00mg生药ml-1。同时设置

5、空白及5-Fu阳性对照孔，对照组则加入相同体积的培养液，每一浓度设8个平行孔。继续培养24h。每孔加入MTT(5gL-1)20μl，继续培养4~6h。每孔加入DMSO100μl。在微型振荡器上摇匀15min，结晶溶解后，立即比色，用ELX800型酶标仪在主波长为570nm，参比波长为630处测量OD值，比色以空白孔调零。抑制率=（1-实验组8孔OD值平均值/对照组8孔OD值平均值）×100%。1.2.4TrypanBlue拒染法选取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度至4.4×105个ml-1，每孔450μl接种于24孔板中，使每孔的细胞数为2×105个

6、。然后，加入不同浓度的受试化合物。每个浓度设3个平行孔，同时设置空白及5――Fu阳性对照孔。将培养板放入37℃，5%CO2饱和湿度孵箱中继续培养24h后每孔加入50μl0.4%TrypanBlue溶液染色。镜下计数，检测活细胞数。抑制率=（对照组3孔活细胞数平均值-实验组3孔活细胞数平均值/对照组3孔活细胞数平均值）×100%。2结果2.1半边旗水溶性成分对人肺腺癌BEL-7402细胞生长的抑制作用半边旗水提物作用于人肝癌BLE-7402细胞24h，能明显地抑制其增殖，且呈剂量依赖关系。结果见表1。表1半边旗水提物对BEL-7402细胞生长的抑制作用(略)

7、与空白组比较，***P＜0.0012.2半边旗水溶性成分对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用从表2可以看出，半边旗水提物能明显地抑制其增殖，且呈剂量依赖关系。表2半边旗水提物对A549细胞增殖的抑制作用(略)与空白组比较，***P＜0.0012.3半边旗水溶性成分对人慢性粒细胞白血病细胞K562细胞增殖的抑制作用半边旗水提物作用于人慢性粒细胞白血病细胞K562细胞24h，能明显地抑制其增殖，且呈剂量依赖关系。与阳性对照药5――Fu相比，其对K562细胞的生长抑制作用更为明显和有效。这说明半边旗水提物对某些对药物敏感的肿瘤细胞有着明显的抑制作用。表3半边旗水

8、提物对K562细胞增殖的抑制作用(略)与空白组比较，***P＜0.