半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究

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1、半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究作者：刘义龚先玲梁念慈【关键词】半边旗；,,水溶性成分；,,抗肿瘤　　摘要：目的研究半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长的抑制作用。方法采用MTT法及TrypanBlue拒染法。结果半边旗水溶性成分对求BEL-7402，A549，K562细胞生长的抑制率达到56.39%，53.85%，74.70%。结论半边旗水溶性成分对多种肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。　　关键词：半边旗；水溶性成分；抗肿瘤　　StudiesontheAntitumorEffectsofSolubleponentsofPteris.semipnnataL.againstVar

2、iousTumorCells　　Abstract：ObjectiveTostudytheantitumoreffectsofthesolubleponentsofPterissemipnnataL.(PsL)onvarioustumorcells.MethodsCellgroediatedbythesolubleponentsofPsLeasuredbyMTTassayandTrypanBlue　exclusion.ResultsTheeffectsofthesolubleponentsofPsLongroentorcells.　　KeyipnnataL;Solubleponents;Ant

3、itumor　　半边旗PterissemipnnataL.(PsL）是一种民间草药，属凤尾蕨科植物，性寒，具疏解风寒、化湿消味、消热解毒的功效。近年来我实验室的研究表明半边旗具有显著的体内外抗肿瘤作用［1~3］，对其作用机理也已作了不少的研究［4，5］。分离、纯化后得到的抗肿瘤活性成分为二萜类化合物5F，6F，A。其中5F能将肿瘤细胞的细胞周期阻滞在G2/M期并能导致其凋亡，但对其经过CO2超临界萃取提走以上二萜类化合物后所得残渣中的水溶性成分（SCPsL）的抗肿瘤活性研究还未见有相关报道。本研究实验包括半边旗水溶性成分的提取、体外抗肿瘤作用的初步筛选及对不同肿瘤细胞生长抑制作用的比较。　　

4、1材料与方法　　1.1材料MTT、TrypanBlue购自Sigma公司；超级无支原体新生牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司；RPMI-1640购自美国Hyclone公司；胰酶购自美国Gibco公司；其余试剂均为国产分析纯。人肝癌BLE-7402细胞、人肺腺癌A549细胞、人慢性粒细胞白血病细胞K562细胞由本室传代。　　1.2方法　　1.2.1半边旗水溶性成分的提取经CO2超临界萃取后半边旗残渣5g，加10倍量95%乙醇水浴回流，微沸1h，滤纸过滤，收集滤液；将滤渣再加10倍量95%乙醇，水浴回流微沸1h，滤纸过滤，得滤液。合并两次所得滤液，回收乙醇得浸膏，加50ml三蒸水，离心10mi

5、n（2000r/min），取上清，制成浓度为100mg生药・ml-1的溶液，过滤除菌备用。　　1.2.2细胞培养BLE-7402，A549，K562细胞培养于含10%小牛血清，100kU・L-1青霉素和100mg・L-1链霉素的RPMI-1640培养液中，37℃、5%CO2饱和湿度细胞培养箱培养。取对数生长期细胞用于实验。　　1.2.3MTT法［6］取对数生长期的期BLE7402，A549细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，RPMI-1640完全培养液调制成5.0×104个・ml-1细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种100μl（含5.0×

6、103个细胞）。培养过夜后，吸出培养液，加入新培养液90μl及不同浓度的半边旗水溶性成分溶液10μl，使终浓度分别为1.25，1.75，2.50，5.00mg生药・ml-1。同时设置空白及5-Fu阳性对照孔，对照组则加入相同体积的培养液，每一浓度设8个平行孔。继续培养24h。每孔加入MTT(5g・L-1)20μl，继续培养4~6h。每孔加入DMSO100μl。在微型振荡器上摇匀15min，结晶溶解后，立即比色，用ELX800型酶标仪在主波长为570nm，参比波长为630处测量OD值，比色以空白孔调零。抑制率=（1-实验组8孔OD值平均值/对照组8孔OD值平均值）×

7、100%。　　1.2.4TrypanBlue拒染法选取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度至4.4×105个・ml-1，每孔450μl接种于24孔板中，使每孔的细胞数为2×105个。然后，加入不同浓度的受试化合物。每个浓度设3个平行孔，同时设置空白及5――Fu阳性对照孔。将培养板放入37℃，5%CO2饱和湿度孵箱中继续培养24h后每孔加入50μl0.4%TrypanBlue溶液染色。镜下计数，