spehplc法测定苦丁茶老叶中熊果酸的含量论文

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1、SPEHPLC法测定苦丁茶老叶中熊果酸的含量论文路玫，李徽，蒙大平，荣延平【摘要】目的建立苦丁茶老叶中熊果酸含量的测定方法。方法采用SPEHPLC法，以1mLOASISRHLBCartridge固相萃取小柱对样品进行提取分离；色谱柱为NovaPakC18柱(3.9mm×150mm，4μm)；以甲醇水磷酸（体积比85∶15∶0.1）为流动相，流速为0.8mL·min－1，检测波长为220nm.freelethodfordetectingthecontentofursolicacidintheoldleavesofIlexKudingchabySPEHPLC.Met

2、hodsUrsolicacidextractedfromtheleavesm×150mm，4μm）columnusingmethanolH2Ophosphate(85∶15∶0.1)asmobilephase.ThefloL·min-1anddetection.ResultsUrsolicacidcouldbeseparatedethodissimpleandaccurate.KeyLOASISRHLBCartridge固相萃取小柱（m×150mm,4.0μm)；流动相为甲醇水磷酸（体积比85∶15∶0.1）；检测波长：220nm；流速：0.8mL·min-1；柱温

3、：30℃。在此色谱条件下，熊果酸的保留时间约为13min。2.2系统适应性试验分别取熊果酸对照品溶液及样品溶液，在上述色谱条件下各进样10μL,结果，样品溶液与对照品溶液在相同的保留时间有相似的色谱峰，而且熊果酸与其他成分能够较好地分离,按熊果酸计算理论塔板数不低于3000，拖尾因子1.02,分离度大于1.5,保留时间约为13min，结果见图1。2.3标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品8.34mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.834mg·ml-1的对照品溶液。分别取该对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0mLA.熊果酸对照品；B.

4、苦丁茶样品图1高效液相色谱图略置10mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别进样10μL，以熊果酸的进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线，结果回归方程为：A＝220215m-7590.60(r＝0.9999)，表明熊果酸的进样量在0.417-3.336μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.4精密度和稳定性试验精密吸取熊果酸对照品溶液10μL，在上述色谱条件下重复进样5次，测定峰面积，结果其峰面积的RSD＝1.34％（n＝5）。精密吸取新配制的样品溶液10μL，每隔1h进样测定1次，连续测定5次，结果测得峰面积的RSD＝1.82％（n＝5

5、），说明样品溶液在5h内稳定性良好。2.5重复性试验对同一批样品（批号：041015），分别取5份，每份约10g，按“2.7”项下操作，结果测得样品中熊果酸的平均含量为160.82μg·g-1，RSD＝1.28%（n＝5），表明本方法的重复性良好。2.6回收率试验取已测知含量的样品(批号041015)5份，每份约10g，分别精密加入0.834mg·mL-1的对照品溶液2.0mL，按“2.7”项下操作，在上述色谱条件下进样10μL，按样品含量测定方法测定，计算平均回收率，结果见表1。表1回收率试验结果略2.7含量测定称取约10g苦丁茶老叶,剪碎，加入80％（体积分数）乙醇溶液

6、160mL，于85℃水浴回流提取2次，每次2.5h。合并提取液，滤过，滤液于85℃水浴挥干，残渣以甲醇溶解并定容至10mL，以0.45μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液1.0mL移入经活化的固相萃取小柱,以重蒸水2mL、30%(体积分数)甲醇2mL依次以3滴/s的速度进行洗脱,最后用80%（体积分数）甲醇2mL以3滴/s的速度洗脱,收集末次洗脱液为样品溶液。将样品溶液在上述色谱条件下进样10μL,.freelS分析［J］.广东药学院学报，2005，21（3）：261-262.［4］蒙大平，黄雪梅，邓玉庄.苦丁茶老叶中槲皮素和山萘素的含量测定［J］.中国医院药学杂志，20

7、06，26(2):135-137.