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《山楂核中熊果酸含量的HPLC测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、上海中医药大学学报第15卷第1期VOL.15NO.12001年3月ACTAUNIVERSITATISTRADITIONISMEDICALISSINENSISPHARMACOLOGIAEQUESHANGHAIMar.,2001山楂核中熊果酸含量的HPLC测定杨晓彤程乐乐糜可周韵丽杨庆尧上海师范大学微生物与免疫学研究所(上海200024)摘要:采用C18反相高效液相色谱RP-HPLC法对山楂核中的熊果酸作含量测定。结果:测得山楂核中的熊果酸含量为01577mg/g,回收率为103113%,保留时间和峰面积的变异系数分别为0118%和11
2、68%(n=8)。山楂核甲醇萃取液在作HPLC分析前,先用硅胶柱吸附,再用洗脱液(环己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1)洗脱,可去除大部分杂质,提高测定效果。关键词:山楂核(SeedofCrataeguspinnatifida),熊果酸,RP-HPLC中图分类号:R282.6文献标识码:B文章编号:1008-861X(2001)01-0055-03熊果酸(Ursolicacid,UA)属三萜类化合物,广泛存在于层析液(环己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1)洗脱,收集洗脱[1]山楂、乌梅、夏枯草等植物。近年发现熊果酸除有抗炎、抗液
3、,减压蒸干,用甲醇溶解并定容至1ml,0122mm膜过滤后进突变活性外,对多种恶性肿瘤细胞亦有强烈的毒杀效行HPLC分析。[2~4][5]应,并有诱导癌细胞分化的能力。已知山楂中含熊果2.1.3样品测定结果山楂核提取样品经硅胶柱预处理后[6][7]酸。有人在山楂核中也检测到熊果酸,但迄今未见其含上HPLC仪测定,测定用流动相为甲醇/水(用甲酸调pH至量报道。本文用HPLC测定了山楂核中的熊果酸含量。3)=95/5(V/V);流速:1ml/min;进样量:20Ll;在215nm波长下检测,用熊果酸标准品作对照。结果:样品在熊果酸标准1
4、仪器与材料品的出峰位置上出现相同的色谱峰(图1)。另在样品中加仪器:BeckmanGoldSystem高效液相色谱仪及软件,125入熊果酸标准品后该峰的面积增加,但保留时间未改变,且型泵,168型紫外二极管阵列检测器;BeckmanUltrasphereC18没有出现新增的峰(图2)。反相柱(416@250mm,加416@50mm保护柱);旋转蒸发器为Bchi公司产品;CQ250超声波发生器产自上海超声仪器厂。材料:熊果酸标准品由中国药品生物制品检定所提供。山楂购自天津市场,品种名:大红袍。测定用甲醇为色谱级。提取用试剂(甲醇、环己
5、烷、乙酸乙酯、冰醋酸)均为化学纯。层析硅胶为上海五四化学试剂厂产品。2方法与结果2.1山楂核样品制备、预处理及熊果酸检出2.1.1样品提取:将鲜山楂沸水煮1min后,分离山楂核,a:山楂核甲醇提取物b:熊果酸60~80e烘干,打成200目的细粉,精密称取山楂核粉1g,加MethanolextractoftheUrsolicacid(uA)100ml甲醇,90e水浴回流提取6h或置超声波发生器内超声SeedsofC.pinnatifida提取1h,过滤,取滤液减压蒸干,残渣用甲醇溶解并定容至图1山楂核甲醇提取物与熊果酸标准品HPLC色
6、谱图5ml,待作硅胶柱预处理。Fig.1HPLCchromatogramsofmethanolextractoftheseedsof2.1.2硅胶柱预处理:取100g层析用硅胶,用二倍柱体C.pinnatifida除上述色谱图外,另以每秒4次的频率记录190~320nm积的洗脱液(环己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1,V/V)洗脱,范围内的光谱吸收,结果两者的光谱吸收图完全一致,其最100e烘至无酸味。取118g装成id8@85mm的硅胶柱。精大吸收在204nm(图3a)。将上述光谱进一步作二阶导数变密吸取015ml待处理样品于硅
7、胶柱上,待甲醇挥干后用7ml换,其二阶导数光谱也完全一致(图3b)。由此可见两者为同一物质,山楂核提取物中的该色谱峰为熊果酸吸收峰。基金项目:上海市高等学校科学技术发展基金资助项目(96011)54实验研究2.2山楂核中熊果酸含量的HPLC测定2.2.1标准曲线制作精密称取干燥至恒重的熊果酸标准品9171mg,甲醇溶解成浓度为01971mg/ml的标准溶液。精密吸取该溶液,加甲醇配制成浓度分别为01194,01097,01049,01024,01012(mg/ml)的溶液进行HPLC测定,并计算回归方程。结果熊果酸峰面积(P.A.)
8、与熊果酸浓度(Conc.)关系为:P.A.=12411465Conc.)01305649(r=019998)。2.2.2精密度测定取熊果酸标准溶液(浓度为01194a:未加熊果酸标准品b:已加熊果酸标准品2mg/ml)连续进样8次,结
