高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究论文

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1、高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究论文.freel。结果雷公藤甲素线性范围为0.0476～0.4760μg，r=0.9991，平均回收率为101.2%，RSD为2.1%（n=6）。结论雷公藤片含量测定限度暂定为：每片含雷公藤以雷公藤甲素（C37H22O14）计.freelg/片。【关键词】雷公藤片雷公藤甲素高效液相色谱雷公藤片为卫矛科木质藤本植物雷公藤Tripterygiumm×4.6mm，5μm）；雷公藤甲素对照品（中国药品生物制品检定所，批号0857-9601）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水；其他试剂为分析纯；雷公藤片由湖北三九黄石药业有限公司提供。2

2、方法与结果2.1色谱条件色谱柱为大连依利特HypersilC18液相色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）；甲醇-水（40∶60）为流动相；检测波长218nm；流速1ml/min；柱温：35℃；理论板数按雷公藤甲素峰计不低于3000。2.2供试液制备方法和洗脱液用量的选择2.2.1供试液制备方法的选择雷公藤制剂中成分较为复杂，不经提取精制难以得到较好的分离效果，参照常雪灵等［2］的文献报道，进行了提取精制方法的考察。精密称取样品粉末约1g，加醋酸乙酯20ml，超声使溶解，加5%HCl溶液15ml洗涤两次，弃去酸液，醋酸乙酯液加10%NaOH溶液20ml，水

3、浴加热15min，分取碱液，并用10%NaOH溶液20ml萃取两次，合并碱液，加稀HCl调pH至4，以醋酸乙酯20ml萃取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10ml作为供试品溶液。精密称取样品粉末约1g，加氯仿10ml，超声10min，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱（内径12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液150ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10ml作为供试品溶液。精密称取样品粉末约1g，加氯仿10ml，超声10min，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱（内径12mm，1

4、00～200目，10g），以10%醋酸乙酯石油醚（60～90℃）50ml洗脱，再以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液100ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10ml作为供试品溶液。取上述3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表1。表13种提取分离方法测定结果（略）结果表明：采用上中性氧化铝柱提取分离效果较萃取法好，方法3中用10%醋酸乙酯石油醚（60～90℃）50ml洗脱主要是除去杂质，但经比较此法对分离影响不大，而以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脱对测定结果无多大影响，但洗下较多杂质，基线波动较大，杂质峰较多，对分离造成一定影响，故采用方法2作为含量测定方法

5、。2.2.2溶剂用量的选择精密称取样品粉末约1g，共3份，分别加氯仿10ml，超声10min，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱（内径12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脱，分别收集洗脱液100，150，200ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10ml作为供试品溶液。将3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表2。表23种溶剂用量测定结果（略）结果表明，以醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液150ml较合适。2.2.3流动相的选择以乙腈-水（30∶70）作为流动相进行试验，结果雷公藤甲素出峰较快，样品溶液难以得到较好分离，改用（15

6、∶85），（20∶80），（25∶75）等雷公藤甲素均不出峰，最后选用甲醇-水（40∶60）为流动相，雷公藤甲素出峰时间约为11min，样品溶液分离较好，无杂质峰干扰。2.3含量测定2.3.1对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.01mg的溶液，作为对照品溶液。2.3.2供试品溶液的制备取本品30片，称定重量，研碎，精密称取10片量，加氯仿10ml，超声10min，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱（内径12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液150ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至1

7、0ml作为供试品溶液。2.3.3线性关系考察精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.0238mg的溶液作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液1，2，4，6，8，10ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20μl，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，雷公藤甲素对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=2110.8X+3.7，r=0.9991，结果表明雷公藤甲素对照品在0.0476～0.4760μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.3.4精密度实验精密吸取同一对照品溶液20μl，重复进样5次，测定雷公藤甲素的吸收峰面

8、积，RSD为1.84%，表明精密度良好。2.3.5稳