高效液相色谱法测定含量示例方法再确证

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1、高效液相色谱法测定含量示例方法再确证　　摘要：目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。方法：以DiamonsilCLC-ODS（150mmx6mm，10lm）为色谱柱，水-甲醇-3.89%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254nm，外标法定量。结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg/ml，相关系数r=0.9991，方法重复性试验RSD为1.42%。结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。关键词：头孢氨苄高效液相色谱法头孢氨芐（Cefal

2、exin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。其含量测定在旧版的中国药典（1995年版）采用碘量法○1。但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；5然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结

3、果○2。现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。1.仪器与试药分析天平（precisainstrumentltdswitzerlandxs225aprecisa），高效液相色谱柱（diamonsicC18250*46mm），检测器（UVD170v），泵（P680HPLCpump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102）2.色谱条件用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇-3.89%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。3.实验试剂制备3.1对照品储备液的制备：对照品储备

4、液的制备：取头孢氨苄对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，为对照品储备液。3.2供试品溶液的制备：去装量差异项下的内容物，混合均匀，精密量取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置于100ml容量瓶里，加流动相适量，充分振摇使溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml置10ml量瓶中。用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。3.35对照品溶液制备：精密量取对照品储备液1ml置10ml量瓶中。用流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。3.4平均内容物：取出20粒并求得平均内容物的量为0.2539g。3.5标示量：0.125g。4.效能指标试验

5、4.1线性关系（标准曲线的制备）：分别精密量取对照品储备液0.2ml，0.4ml，0.8ml，1.6ml，2.0ml置10ml量瓶中。用流动相稀释至刻度，摇匀，得梯度浓度对照品溶液○3。在上述色谱条件下进样测定峰面积。以对照品浓度作横坐标（X），峰面积作为纵坐标（Y）得线性回归方程；y=112.02x+1.9543r=0.9991.表明头孢氨苄在0.02mg/ml～0.2mg/ml的范围内具有良好的线性关系○4图.1。4.2专属性：按处方比例，取出除头孢氨苄的其他药味按照生产工艺制备阴性样品。按照“供试品溶液的制备”项下制备，按前述色谱条件分别对对照品溶液，供试品溶液进样测定。观察色谱图（

6、图.2）。4.3方法重复性试验：重复取供试品六份，按“供试品溶液制备”项下制备供试品溶液。分别进样测定。计算头孢氨苄的含量（表2）。结果：每粒平均含量为0.126g。RSD为1.42%。该方法的精密度。5.供试品的测定5取供试品溶液3份，分别进样，测得3组标示量（%）分别为96.4、100.4、108.5，平均值标示量（%）为107.7，属于合理范围。6.讨论碘量法要经过复杂的操作，繁多的提取分离处理步骤，干扰会十分严重，而且比色时实验人为带入的误差很大。本文进行确证研究的高效液相色谱法测定复方头孢氨苄胶囊中的头孢氨苄含量的方法，省去前方法的复杂前处理，缩短实验时间，具有简单方便、高效率、

7、数据准确可靠等特点，更加合理优越，通过对专属性实验的色谱图分析，可以排除了干扰物质对头孢氨苄含量的测定不利影响，同时流动相配比相对简单，不需要添加缓冲盐类物质，方便清洗柱子。因此可以得出结论，确证本法为测定头孢氨苄含量的准确有效的方法。参考文献：[1]StatePharmacopoeiaCommissionoftheP.R.ofChina.PharmacopoeiaofthePeople’sRepublicofChina