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1、高效液相色谱法测定小蓟中芦丁含量【摘要】目的采用高效液相色谱法对小蓟中芦丁成分进行定量。方法采用LichrospherC18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),柱温30℃,甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长254nm。结果小蓟中芦丁的含量为0.5808mg/g。结论经过系统的方法学考察,该方法具有简便、专属、稳定、可重复的特点,可用于小蓟中芦丁的含量测定。【关键词】小蓟；芦丁；含量测定；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveHPLCethodfordeterminationofrutininherbacrisii.Me
2、thodsLichrospherC18column(4.6mm×200mm,5μm)ethoanol-aceticacid(35∶65)asmobilephase,floL/min,columntemperatureat30℃,detection.ResultsThecontentofrutininherbacrisiig/g.ConclusionsThemethodisprovedtobesimple,rapid,andaccurate.Itcanbeappliedtocontentdeterminationofrutininherbacrisii.Keysetosum(B.；ru
3、tin；contentdetermination；HPLC 小蓟为菊科植物小蓟[Cirsiumsetosum(B.]的干燥地上部分或根,具有凉血止血、祛瘀消肿的功能,可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒等。小蓟中所含有机酸中有芦丁、咖啡酸等,文献记载芦丁、咖啡酸为其止血活性成分。本实验采用高效液相色谱法测定小蓟中芦丁的含量,方法稳定、快速、重现性好。 1实验材料 1.1仪器LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A检测器,CLASS-LC10色谱工作站；sartoriusBP211D电子天平；SHIMADZUAY220电子天平；KQ-500型超声波清
4、洗器。 1.2试剂与药物 甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。芦丁购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705)。小蓟药材分别购自江苏(南京医药股份有限公司,批号020313)、安徽(安徽省亳州市永刚饮片有限公司,批号031205)、上海(上海华宇药业有限公司,批号040802),经本院药用鉴定教研室陈建伟教授鉴定为小蓟正品[Cirsiumsetosum(B.]。 1.3色谱条件及系统适用性试验 1.3.1色谱条件的选择 色谱柱：LichrospherC18(4.6mm×200mm,5μm),柱温30℃,流动相：甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65),流
5、速1.0mL/min；检测波长：254nm。对照品、样品的高效液相色谱图见图1。 1.3.2提取溶剂的考察 取本品2份,各1.0g,精密称定,置2个50mL具塞锥形瓶中,分别加入50mL甲醇和50mL40%甲醇,称重,浸置1h,超声处理(功率500in,补足称重,滤过；微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。分别吸取上述2份溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,按外标法以峰面积计算。结果表明,以体积分数为40%甲醇为提取溶剂效果较好。 2方法与结果 2.1溶液制备 2.1.1对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品0.98mg,置25mL容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀
6、,即得。 2.1.2供试品溶液的制备 各取3个产地药材粉末(过2号筛)1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加入50mL40%甲醇,称重,浸置1h,超声处理(功率500in,补足称重,过滤,微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.2线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5mL稀释10mL,依次精密吸取稀释的对照品溶液10μL注入液相色谱仪,测定其峰面积值,以芦丁的浓度(g/L)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归。得回归方程为：Y＝25845255X－28716,r＝0.9996。结果表明,芦丁在0.00392～0.0196g/L范围内具有良好的线性
7、关系。 2.3精密度试验 吸取3号对照品溶液10μL,重复进样5次,测定其峰面积积分值,RSD＝1.503%。表明本法精密度较好。 2.4稳定性试验 分别于0、1、2、4、6、12、24h精密吸取同一份供试品溶液20μL进样,测定其峰面积积分值,计算6h内RSD＝1.972%。结果表明,供试品溶液在6h内常温保存基本稳定。 2.5重复性试验 取同一批号小蓟样品共5份,每份1.0g,精密称定,按供试品溶液的制备方法平行制备5份,分别进样10μL,
