高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量

《高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量【关键词】反相高效液相色谱；薄层色谱鉴别；芦丁；超临界萃取　　Abstract:ObjectiveToexplorestoloniferumbyTLCandestablishamethodtodetermineitscontentbyRP-HPLC.MethodsThedeterminationmetryC18columnat25℃.Methodstetrahydrofuran:0.2%citricacid(14∶1∶85)obilephaseatavelocityof1ml·min-1andthedetectio

2、n.ResultsRutinStoloniferum.Thecalibrationcurveg·ml-1forrutin.Thesamplestoloniferum.TheestablishedRP-HPLCmethodhasperfectlinearrelationship,highprecisionandrecoveryrateanditissuitabletodeterminethecontentofrutininSFEextractofSparganiumStoloniferum.　　Keystoloniferum，始载于《本草拾遗》，为常用中药，是荆

3、三棱科植物黑三棱的干燥块茎，主要含挥发油类和黄酮类［1～3］，具有抗凝血及抗血栓和镇痛作用［4］，临床用于治疗中风病、冠心病、宫外孕、阑尾周围脓肿及慢性肝炎、慢性盆腔炎等。另外其和莪术一起使用具有抑制肿瘤的功能［5］，在抗癌中药的配方中起着非常重要的作用。目前文献关于三棱的提取研究并不多，尤其是对其化学成分等基础研究更少，文献［6］报道的黄酮类成分为山萘酚和5,7,3',5'-四羟基双氢黄酮醇-3-O-β-D-葡萄糖苷，还没有三棱中含有芦丁成分的文献报道。因此本实验采用薄层色谱法对三棱超临界二氧化碳萃取物中芦丁进行了鉴定，并利用高效液相色谱法对芦丁的含量进行测

4、定。　　1仪器与材料　　1.1仪器与试剂　　江苏南通华安公司的Ha120-50-01型超临界萃取装置；岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，岛津ShimadzuCLASS-VPV6.12SP4工作站；KQ-250B型超声波清洗器。　　1.2对照品与供试品　　三棱（北京同仁堂集团）；芦丁对照品（中国生物制品检定所）；甲醇（分析纯）；乙腈（色谱纯）；四氢呋喃（色谱纯）；枸橼酸（色谱纯）；二氧化碳（99.95%）；本实验用水均为超纯水。　　2方法与结果　　2.1三棱超临界提取物中芦丁的薄层鉴别　　2.1.1供试品溶液的制备　　三棱生药粉碎、过40目筛、60℃烘干6h

5、，精确称1000g过筛的三棱粉，加入180ml夹带剂，充分混合过夜，然后置于萃取釜中。对萃取釜、解析釜Ⅰ、解析釜Ⅱ分别进行加热,当温度分别达到设定温度时,通过高压泵对萃取釜和两个解析釜进行加压,当压力分别达到设定压力后,进行静态萃取，之后开始循环萃取,并保持恒温和恒压,CO2流量为40L/h。萃取2h后,从解析釜I和Ⅱ的出料口放出黄色油状液体,萃取物称重，量体积，过滤，滤液转移至100ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀得供试品溶液。　　2.1.2芦丁对照品溶液I的制备　　精密称取芦丁对照品1.0mg，置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.02mg

6、·ml-1的供试品溶液。　　2.1.3薄层鉴别　　用定量毛细管分别吸取上述对照品溶液I、供试品溶液各20μl，于聚酰胺膜上分别点样，以80%乙醇作为展开剂，展开，晾干，以1%的三氯化铝乙醇溶液显色，置紫外灯下检视，供试品溶液在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，说明样品中含有芦丁成分。　　2.2.2色谱系统适用性实验按芦丁峰计算，色谱系统的理论塔板数为57059；芦丁与其前后相邻的色谱峰的分离度分别为2.3和1.5，芦丁与相邻的色谱峰可以完全分离。芦丁峰的拖尾因子为1.07，峰形对称性良好。　　2.2.3对照品溶液II的制备精密称取芦丁对照品15.0mg

7、，置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.3mg·ml-1的对照品溶液Ⅱ。　　2.2.4线性关系精密吸取对照品溶液Ⅱ0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml置于10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。按“2.2.1”色谱条件测定。以峰面积为横坐标、进样浓度为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程：Y=-5.7380×10-5+6.2708×10-8X,r=0.9999结果：芦丁在0.00304～0.02432mg·ml-1浓度范围内线性关系良好。　　2.2.5样品稳定性实验样品溶液室温放置，每隔2h进样一次，测定芦丁的含量，共测5次，R

8、SD为1.87%，说明样品溶液在8h内