高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量

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1、高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量【摘要】　　目的建立三棱超临界CO2萃取物中芦丁的鉴别和含量测定方法。方法在聚酰胺膜上点样，以80%乙醇作为展开剂鉴别芦丁，采用SymmetryC18色谱柱，以乙腈-四氢呋喃-0.2%枸橼酸（14∶1∶85）为流动相，柱温25℃，在流速为1.0ml·min-1，360nm的检测波长下，测定芦丁含量。结果在三棱的超临界萃取物中含有芦丁成分，建立的液相色谱方法在芦丁浓度为0.00340～0.02432mg·ml-1的范围内线性关系良好，样品在8h内稳定，平均加样回收率为98.56%，以峰面积作精密度实验，RSD为1.3

2、8%。结论三棱的超临界萃取物中含有芦丁，建立的高效液相色谱方法线性关系良好，精密度和回收率高，适合于三棱中芦丁含量的测定。【关键词】反相高效液相色谱；薄层色谱鉴别；芦丁；超临界萃取　　Abstract:ObjectiveToexplorestoloniferumbyTLCandestablishamethodtodetermineitscontentbyRP-HPLC.MethodsThedeterminationmetryC18columnat25℃.Methodstetrahydrofuran:0.2%citricacid(14∶1∶85)obilepha

3、seatavelocityof1ml·min-1andthedetection.ResultsRutinStoloniferum.Thecalibrationcurveg·ml-1forrutin.Thesamplestoloniferum.TheestablishedRP-HPLCmethodhasperfectlinearrelationship,highprecisionandrecoveryrateanditissuitabletodeterminethecontentofrutininSFEextractofSparganiumStoloniferu

4、m.　　Keystoloniferum，始载于《本草拾遗》，为常用中药，是荆三棱科植物黑三棱的干燥块茎，主要含挥发油类和黄酮类〔1～3〕，具有抗凝血及抗血栓和镇痛作用〔4〕，临床用于治疗中风病、冠心病、宫外孕、阑尾周围脓肿及慢性肝炎、慢性盆腔炎等。另外其和莪术一起使用具有抑制肿瘤的功能〔5〕，在抗癌中药的配方中起着非常重要的作用。目前文献关于三棱的提取研究并不多，尤其是对其化学成分等基础研究更少，文献〔6〕报道的黄酮类成分为山萘酚和5,7,3',5'-四羟基双氢黄酮醇-3-O-β-D-葡萄糖苷，还没有三棱中含有芦丁成分的文献报道。因此本实验采用薄层色谱法对三棱

5、超临界二氧化碳萃取物中芦丁进行了鉴定，并利用高效液相色谱法对芦丁的含量进行测定。　　1仪器与材料　　1.1仪器与试剂　　江苏南通华安公司的Ha120-50-01型超临界萃取装置；岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，岛津ShimadzuCLASS-VPV6.12SP4工作站；KQ-250B型超声波清洗器。　　1.2对照品与供试品　　三棱（北京同仁堂集团）；芦丁对照品（中国生物制品检定所）；甲醇（分析纯）；乙腈（色谱纯）；四氢呋喃（色谱纯）；枸橼酸（色谱纯）；二氧化碳（99.95%）；本实验用水均为超纯水。　　2方法与结果　　2.1三棱超临界提取物中芦丁的薄层鉴

6、别　　2.1.1供试品溶液的制备　　三棱生药粉碎、过40目筛、60℃烘干6h，精确称1000g过筛的三棱粉，加入180ml夹带剂，充分混合过夜，然后置于萃取釜中。对萃取釜、解析釜Ⅰ、解析釜Ⅱ分别进行加热,当温度分别达到设定温度时,通过高压泵对萃取釜和两个解析釜进行加压,当压力分别达到设定压力后,进行静态萃取，之后开始循环萃取,并保持恒温和恒压,CO2流量为40L/h。萃取2h后,从解析釜I和Ⅱ的出料口放出黄色油状液体,萃取物称重，量体积，过滤，滤液转移至100ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀得供试品溶液。　　2.1.2芦丁对照品溶液I的制备　　精密称取芦丁对照品1

7、.0mg，置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.02mg·ml-1的供试品溶液。　　2.1.3薄层鉴别　　用定量毛细管分别吸取上述对照品溶液I、供试品溶液各20μl，于聚酰胺膜上分别点样，以80%乙醇作为展开剂，展开，晾干，以1%的三氯化铝乙醇溶液显色，置紫外灯下检视，供试品溶液在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，说明样品中含有芦丁成分。　　2.2三棱超临界萃取物中芦丁含量的测定　　采用高效液相色谱法测定样品中芦丁的含量。　　2.2.1色谱条件色谱柱：SymmetryC18（250m×4.6nm，5μm）；流动相：乙腈-四氢呋喃-0

8、.2%枸橼酸（14∶1∶85），柱温2