心衰大鼠心肌细胞对ca2+和异丙肾上腺素的反应

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1、心衰大鼠心肌细胞对Ca2+和异丙肾上腺素的反应【关键词】心力衰竭心肌细胞异丙肾上腺素Abstract:ObjectiveToinvestigatethereactionofcardiomyocytesfromisoproterenol-inducedheartfailurerattodifferentconcentrationsofcalciumandisoproterenol.MethodsSDratslydividedintoaheartfailuregroupandacontrolgroup,erusedtoinduceheartf

2、ailureodynamicparametersoftheanimalandthecontractionamplitudeandsurvivalrateofisolatedcardiomyocytesined.Resultsparedyocytesurvivalrateandcontractionamplitudeoralregulationsexcluded,thecontractionofcardiomyocytesthemselvesisreducedinisoproterenol-inducedheartfailurerats.K

3、eyyocytes;isoprenaline心衰是包括心肌梗死、心肌炎、高血压性心脏病等心血管疾病的最后阶段。这些疾病往往引起心肌细胞的凋亡和细胞数目减少，最终导致心衰。目前，大多数研究都是在整体水平上观察心肌细胞的改变，本研究排除神经和体液等因素的影响，在细胞水平上直接观察了心衰后单个心肌细胞对Ca2+和β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素的反应，为心衰的研究进一步提供理论和实验依据。1材料和方法1．1实验动物实验选用成年健康的Sprague-Daa公司），胶原酶Ⅱ型（Gibco公司），透明质酸酶（Sigma公司），Hepes（北京华美）

4、，DMEM(高糖)培养基（Hyclone公司），牛磺酸（Sigma公司），肌酸（Sigma公司），牛血清白蛋白（Amresco公司）。1．3心力衰竭动物模型的制作参考Rona等［1］异丙肾上腺素所致心衰的方法略作修改。心衰组腹腔注射异丙肾上腺素4mg/kg，1次/d，连续3天。1．4正常及心衰大鼠血流动力学测定大鼠注射异丙肾上腺素完成1周后，存活8只，用戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔注射麻醉，分离右颈总动脉，置入微压力传感导管，测血压及左心室压力最大上升、下降速率（±dp/dt）变化，考查模型成功情况。1．5正常及心衰大鼠心肌细胞对不同

5、浓度Ca2+和ISO的反应1．5．1心肌细胞的分离和培养大鼠测完血流动力学指标后，迅速开胸取心脏，悬挂心脏于Langendorff灌注装置上，经主动脉逆行灌流分离心肌细胞［2］。将新分离的正常和心衰心肌细胞计数后，分为正常组和心衰组，接种于12孔培养板上，置于CO2培养箱中悬浮培养24h。1．5．2培养心肌细胞存活率的计算将长杆状细胞定为有功能的细胞，心肌细胞存活率=（长杆状细胞数量/全部细胞数量）×100%。1．5．3单个心肌细胞收缩功能的测定把培养的各组心肌细胞置于心肌细胞收缩功能分析装置的细胞浴槽中［3］，用蠕动泵将含有不同浓度的C

6、a2+和ISO的KH液循环至细胞槽内，然后用刺激器（0.5Hz，37℃）对细胞进行刺激。选择横纹清晰、胞膜完整、长杆状的心肌细胞进行分析。1.6统计学处理应用SPSS13.0软件分析，数据以x±s表示，2组间均数比较采用t检验，多组间比较用单因素方差分析，检验水准：α=005。2结果2．1血流动力学变化与正常组比较，心衰组收缩压(SP)和舒张压(DP)升高，心室内压变化速率(±dp/dt)的绝对值下降(P<0.05)。表明模型制作成功。表1血流动力学测定结果2．2正常和心衰大鼠心肌细胞的存活率心肌细胞培养24h后，正常组心肌细胞存

7、活率为（80.67±3.33）%，高于心衰组心肌细胞的（63.50±3.73）%（P<0.01）。2．3正常和心衰大鼠心肌细胞收缩幅度在不同浓度Ca2+刺激下（表2），心衰组心肌细胞收缩幅度都较同浓度正常组降低（P<0.01）。随着Ca2+浓度增高，正常组和心衰组心肌细胞收缩幅度都增强（P<0.01）。3讨论在整体水平上，心脏受神经、体液和自身等因素的影响，心肌细胞也是处于相当复杂环境中受许多因素作用的。心力衰竭时，心脏功能下降，但这时单个心衰心肌细胞功能是否变化，我们了解并不多。因此，用SIO制作了大鼠心衰模型，然后分

8、离心衰大鼠心肌细胞，用无血清DMEM培养基培养，排除了神经、体液等在体因素的影响和非心肌细胞（如成纤维细胞和内皮细胞）对心肌细胞的干扰，在一个可控制的环境中对心衰心肌细胞的特性进行检测，去观察