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《他拉达非对肺动脉高压模型大鼠降钙素基因相关》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、他拉达非对肺动脉高压模型大鼠降钙素基因相关肺动脉高压（PAH)是以平滑肌细胞增生、肺血管收缩及重构为特征的疾病，能引起患者右心室肥厚、肺血管阻力增加最终导致患者右心衰竭和死亡。近年的研究显示，血管重构是PAH发生和发展的重要病理生理机制，肺动脉平滑肌细胞的过度增殖与迁移是引起血管重构的关键因素[1]。降钙素基因相关肽（CGRP)是感觉神经的重要递质，是目前已知最强的舒血管物质，在调节血管阻力和维持血压稳定等方面有重要作用[2],而p27及ERK1/2参与的信号通路在调节血管平滑肌细胞增殖及血管重构方面亦有重要作用。他达拉非为5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，广泛应
2、用于治疗肺动脉高压，但其作用机制尚未完全明了。本研究中基于CGRP具有降压及抑制血管重构的作用，探讨了CGRP及ERK1/2/p27在他达拉非降低肺动脉高压、预防缓解肺血管重构中的作用，现报道如下。1材料与方法1.1仪器、试药与动物仪器:Model680型酶标仪（美国Bio-Rad公司）；光学显微镜(曰本Olympus公司）；BL-410型多功能生理记录仪（成都泰盟科技有限公司）;MiniPROTEAN电泳系统（美国Bio-Rad公司）。试药：盐酸他达拉非片（美国Elilillyand公司，国药准字H20120472，规格为每片20mg),药片粉碎后溶于10mL生
3、理盐水备用；野百合碱（MCT,Sigma公司，批号为063K1183),溶于1mol/L稀HCl溶液，制成1%浓度溶液,调pH至7.2,加生理盐水配制成10g/LMCT溶液。兔抗鼠CGRP多克隆抗体(美国Sigma公司）；小鼠抗大鼠p27单克隆抗体、小鼠抗大鼠ERK1/2单克隆抗体、小鼠抗大鼠p-ERK1/2单克隆抗体、小鼠抗大鼠GADPH单克隆抗体(美国SantaCruz公司）。动物:36只健康雄性SD大鼠,SPF级,体重180〜200g,由南方医科大学动物实验中心提供,许可证号SCXK(粵)2011-0015。动物饲养及所有操作流程均遵守《实验动物管理条例》,
4、可自由进食及饮水。1.2方法动物模型建立：适应性饲养5d后，将36只雄性SD大鼠随机分为3组，每组12只，A组为MCT诱导肺动脉高压（PAH)组，B组为他达拉非组，C组为对照组。A组、B组大鼠给予皮下注射已配制好的MCT溶液60mg/kg,C组给予腹部注射相应剂量生理盐水，相同条件下喂养，自由饮食、饮水。4周后，动物模型经胸体彩超鉴定后,B组大鼠给予0.5mg/(kg•d)他达拉非溶液灌胃处理，A组、C组给予相同剂量生理盐水灌胃处理,相同条件饲养4周后，取材进行相关检测。血流动力学及右心室肥厚病变分析：试验中大鼠水合氯醛腹腔麻醉后将右心导管预充肝素盐水后与压力换能
5、器相连，用20号套管针经右心室穿刺至肺动脉主干记录肺动脉收缩压(PASP)及平均肺动脉压(mPAP);处死大鼠,结扎主动脉,取心、肺，经生理盐水漂洗后结扎肺动脉，分离心脏，秤取游离右室壁和左室+室间隔质量（RV,LV+S),计算右心肥厚指数RV/(LV+S)。肺血管形态学观察：石蜡包埋固定并切片，将切片经HE染色后置于显微镜下观察，随机选取直径50〜150肺小动脉标本，用图像分析技术计算肺血管内外管径均值，管壁厚度（SF,0.1%N行统计学分析。计量资料以X±s表示，行t检验;计数资料行f检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果结果见表1和表2,图1和图2。氧
6、、炎症及药物刺激能使肺血管内皮细胞结构、功能及代谢发生紊乱，启动PAH的发生。血管内皮损伤破坏了其屏障作用，干扰了平滑肌细胞与内皮细胞间的内皮-肌连接作用，促进肺血管平滑细胞过度增殖，引发肺血管重构。而在肺血管重构的过程中细胞周期调控相关因子在其中发挥重要的作用,27作为细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK)的负调节因子，能通过抑制cyclin/CDK复合物的磷酸化，降低其活性，阻止细胞过度增殖。动物试验研究显示，激活ERK1/2信号通路可促进p27的降解，导致细胞进入细胞增殖周期。(Qin等的研究结果显示，在肺动脉平滑肌及细胞中CGRP能显著抑制血管紧张素n的表达，而
7、ERK1/2在此过程中被激活。目前,PAH治疗的选择一般包括药物治疗、介入及外科治疗，其中药物治疗包括钙离子拮抗剂、内皮素受体拮抗剂等肺动脉血管扩张剂，通过阻断肺动脉高压发病的不同环节起作用，取得了较好的疗效。但介入及外科治疗，包括肺移植、心肺联合移植及经皮球囊房间隔造口术，手术风险大，术后并发症多[8]。他达拉非为新型长效、具有选择性的磷酸二酯酶抑制剂，具有较好的耐受性，能长时间扩张血管，提高运动耐量，降低恶化发生率，可显著改善患者的生活质量[9]。本研究中，采用野百合碱建模，且后期对大鼠血流动力学变化及右心肥厚指标分析，结果显示PAH模型组RVSP及mPAP显
8、著增高，他
