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1、姜黄素不同提取方法比较研究：陈雁虹,秦波,张媛媛,程伟,吕圭源,叶祖光【摘要】目的对5种提取姜黄素的不同方法进行比较。方法以各法提取所得的姜黄素含量与得膏率作为评价指标,优选姜黄素的提取工艺。结果80℃乙醇温浸提取姜黄素所得的含量最高,为姜黄素的优选提取工艺。结论该法提取姜黄素含量高,操作简单,稳定可行。【关键词】姜黄；姜黄素；提取方法姜黄(CurcumalongaL.)于姜科植物姜黄的干燥根茎,主要产于我国四川、云南、广西、广东、福建、台湾等地。姜黄性温,味辛、苦,具有破血行气、通经止痛的作用,常用于胸胁刺痛、闭经、癥瘕、风湿肩臂疼痛、跌扑肿痛等[1]。姜黄的化学
2、成分包括姜黄素类化合物(curcumins)、萜类化合物(Terpenoids)、甾醇类化合物(sterols)、糖类化合物(Carbohydrates)及微量元素等。其中姜黄素类化合物主要包括姜黄素(curcumin)、去甲氧基姜黄素(demethoxy-curcumin)和双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycur-cumin)[2]。姜黄素(C21H20O6)为醇溶性二苯基庚烃类化合物,不溶于冷水,微溶于乙醚和苯,加热时溶于乙醇、乙二醇,易溶于冰醋酸和碱溶液。 姜黄素在高温、强酸、强碱或强光环境中稳定性较差[3],因此提取温度不宜过高。目前,其主要提取
3、方法有甲醇、乙醇有机溶剂提取法、碱水热提法、酶解提取法、外场辅助提取法等,本实验选用碱水热提、酶解提取、乙醇回流提取、乙醇温浸提取、乙醇渗漉提取5种方法,对各法提取所得的姜黄素含量与得膏率进行了考察比较,为姜黄素的研究提供参考和依据。1仪器与试药FZ102微型植物试样粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂)；DZKicellulase,Sigma)；其他所用试剂均为分析纯,HPLC分析所用试剂为色谱纯。 2方法与结果 2.1提取方法 2.1.1姜黄碱水回流提取[2] 姜黄粉碎过40目筛,取50g,加水,用1%氢氧化钠溶液调pH值至9.2,于沸水中提取3次,加水量分别
4、为原药材重量的10、8、6倍。提取时间分别为60、54、30min。 2.1.2姜黄酶解后碱水回流提取[4] 姜黄粉碎过40目筛,取50g,加6倍量水在90℃水浴中保温1h,降温,加入半纤维素酶1.75mg,并加水至10倍量,用1%盐酸溶液调pH值至4.5,于50℃水浴中酶解2h,酶的浓度为0.35mg/mL,酶解后用1%氢氧化钠溶液调pH值至9.2,按“2.1.1”项下方法用碱水提取。 2.1.3姜黄乙醇回流提取 姜黄粉碎过40目筛,取50g,于80%乙醇中加热回流提取3次,3次的乙醇用量均为原药材重量的6倍。提取时间每次2h。 2.1.4姜黄乙醇温浸提
5、取 姜黄粉碎过40目筛,取50g,于80%乙醇中加热至80℃,保温温浸提取3次,乙醇用量均为原药材重量的6倍。提取时间每次2h。 2.1.5姜黄乙醇渗漉提取[5] 姜黄粉碎过40目筛,取100g,以80%乙醇为溶剂避光浸渍6h后渗漉提取,乙醇用量为原药材重量的4倍,漉速为9mL/(min·kg),收集3.3倍药材重的漉液。 2.2浸膏得率的测定按各法提取后,合并提取液、滤过,滤液60℃减压回收溶剂后水浴浓缩至一定浓度。真空干燥至恒重,得浸膏,精密称量,计算浸膏得率[浸膏得率(%)＝浸膏净重(g)/药材量(g)×100%],结果见表1。 2.3姜黄素含量的测
6、定 2.3.1色谱条件 色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm,5μm)；预柱：KromasilC18(7.5mm×4.6mm,5μm)；检测波长430nm；流动相：乙腈-4%冰醋酸(48∶52)；柱温30℃；流速1.0mL/min。 2.3.2标准曲线的制备 精密称取姜黄素对照品适量,加甲醇溶解并定容,配制成11.84μg/mL的对照品溶液。分别以3、5、10、12、15、18μL进样,按上述色谱条件测定峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线形回归,得回归方程：Y＝4827.3X－10.464,R2＝0.9995,r＝0.9997
7、,结果表明,姜黄素在0.03552～0.21312μg之间峰面积与进样量呈良好的线性关系。 2.3.3样品的含量测定 将对照品制备成9.944μg/mL的甲醇溶液。各样品浸膏干粉称取适量,置50mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,再精密移取2mL置10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,混匀,微孔滤膜过滤(0.45μm),取续滤液作为样品溶液。在上述色谱条件下,对照品溶液和样品溶液分别进样10μL,测定姜黄素峰面积,按峰面积计算姜黄素的含量。结果见表2。 g)]＝(样品峰面积/对照品面积)×9.944(μg/mL)÷样品浓度(mg/mL)姜黄素含量(mg)＝g)×
