不同方法制酒萸肉饮片高效液相指纹图谱的建立与比较

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1、不同方法制酒萸肉饮片高效液相指纹图谱的建立与比较作者：张振凌，朱轩，刘博，吴国学，张红伟【摘要】目的建立不同方法制酒萸肉饮片以及山茱萸饮片的高效液相指纹图谱并对其进行比较。方法高效液相法建立指纹图谱；指纹图谱处理软件计算相似度，并进行图谱比较。结果分别建立了加压蒸酒萸肉饮片和常用蒸酒萸肉饮片高效液相指纹图谱。不同产地、不同批次、同一炮制方法和工艺的山茱萸饮片指纹图谱相似度均大于0.9。山萸肉生品和酒萸肉饮片高效液相指纹图谱有一定差异。结论高效液相指纹图谱可用于不同方法制酒萸肉饮片和山茱萸饮片的鉴别和质量控制。【关键词】山茱萸；高效液相；指纹图谱　　　　山茱萸系山茱萸科植物山茱萸Cornuso

2、fficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉，为临床常用名贵中药。目前对山茱萸饮片的质量控制上，多是采用有效成分或指标性成分的检测，而这样的质量控制方法并不能反映其完整的真实质量。采用中药指纹图谱来对其进行质量控制，可以较为全面地反映中药材及其饮片所含成分的真实情况，进而用于中药的鉴别和质量控制。为此我们对不同方法炮制的酒萸肉饮片建立高效液相指纹图谱，并对其进行分析和比较。　　1仪器和试药　　1.1仪器LC20AT（SHIMADZU）；Thermohypersilgold(4.6mm×250mm)高效液相色谱柱；工作站：CSLight；检测器：SPD20A；METTERA

3、E240电子天平（瑞士）；BS210S型电子天平。　　1.2试剂与样品　　1.2.1试剂色谱乙腈；色谱醇；娃哈哈纯净水；其余均为分析纯。马钱素、莫诺苷、熊果酸由中国药品生物制品检定所提供，供指纹图谱参照用。　　1.2.2样品及制备山茱萸采自河南的巩义、白云山、郏县、南召、西峡、南阳、宛西及实验室陈品共10批样品，经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc干燥果肉。　　1.2.2.1常压酒蒸品将山茱萸药材除杂后加黄酒闷润，蒸制5h，干燥，粉碎过2号筛备用。　　1.2.2.2加压酒蒸品将山茱萸药材除杂后加黄酒闷润，置高压容器中

4、加压蒸制，干燥，粉碎过2号筛备用。　　2不同方法制酒萸肉饮片HPLC指纹图谱的建立　　2.1供试品溶液的制备［1］精密称取样品粉末（过40目筛）0.5g,加甲醇20ml,水浴加热回流1h,滤过，药渣再同法提取两次，滤过，合并3次滤液，低温挥去溶剂后用甲醇溶解并定容至25ml，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液约5ml，取续滤液作为供试品。　　2.2对照品溶液的制备精密量取莫诺苷、马钱素适量，加甲醇配制成浓度为50μg/ml的溶液，即得。　　2.3流动相梯度的选择经实验比较，0.1%磷酸水溶液与0.1%磷酸乙腈梯度洗脱，能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰较多；分析时间70min,7

5、0min后无特征峰出现。　　2.4色谱条件色谱柱：Thermohypersilgold(4.6mm×250mm)高效液相色谱柱；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：240nm；分析时间：70min；进样量；供试品和参照物各10μl。　　2.5精密度实验精密吸取各供试品溶液10μl各连续进样5次，均以马钱素峰作为参照峰，分别计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果显示不同制品山茱萸共有峰相对保留时间RSD小于3%和相对峰面积的RSD小于5%，表明在此方法下精密度良好。　　2.6重现性实验分别精密称取常压酒蒸山萸肉、加压酒蒸山萸肉5份各0.5g,按照制备供试品溶液的方法处理，

6、分别进样5次，均以马钱素作为参照峰，分别计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果显示不同制品山茱萸共有峰相对保留时间RSD小于3%和相对峰面积的RSD小于5%，表明在此方法下重现性良好。　　2.7不同方法制酒萸肉饮片高效液相指纹图谱及技术参数以总峰面积中所占比重均较大且相对稳定的马钱素峰作为参照峰，山茱萸常压酒蒸品选取共有峰10个，山茱萸加压酒蒸品选取共有峰9个，分别算得相对保留时间和相对峰面积。结果见图1～2及表1～4。　　图1常压酒蒸山萸肉饮片10批样品二维图（略）　　图2加压酒蒸山萸肉饮片10批样品二维图（略）　　从表1～2中可以得出，常压酒蒸山萸肉饮片指纹图谱共有峰相对保留时间

7、基本一致，共有峰相对峰面积差异较大。表明不同产地常压酒蒸山萸肉有效成分含量差异较大。　　表1常压酒蒸山萸肉饮片指纹图谱共有峰相对保留时间（略）　　表2常压酒蒸山萸肉饮片指纹图谱共有峰相对峰面积（略）　　表3加压酒蒸山萸肉饮片指纹图谱共有峰相对保留时间（略）　　表4加压酒蒸山萸肉饮片指纹图谱共有峰相对峰面积（略）　　样品编号前两位“01～10”分别代表产地为巩义、白云山、郏县、南召A、西峡、南阳、南召B、实验室