首乌藤超微饮片的高效液相色谱指纹图谱研究

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1、首乌藤超微饮片的高效液相色谱指纹图谱研究作者：肖娟，张水寒，蔡萍，郭伟伟，蔡光先【摘要】　　目的研究首乌藤超微饮片的指纹图谱。方法色谱柱为大连依利特公司HypersilBDSC18(4.6mm×200mm,5μm)。流动相为乙腈-1%冰醋酸,柱温为35℃,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm，进样量为20μl。结果初步建立了首乌藤超微饮片的HPLC指纹图谱，标定了9个共有指纹峰。结论利用首乌藤超微饮片高效液相色谱（HPLC）指纹图谱可以较好地反映首乌藤超微饮片的内在质量。【关键词】首乌藤超微饮片高效液相指纹图谱高效液相色谱法　　Abstract:ObjectiveTodeter

2、minetheHPLCfingerprintofCaulisPolygoniMultiflori.MethodsChromatographiccolumnm×200mm,5μm).Mobilephasentemperaturel·min-1,thedetectionandthesamplesizeonpeaksethodanddatacanbeusedtocontrolthequalityofthecaulispolygonimultiflori.　　KeymultiflorumThunb.的干燥藤茎,具养血安神，祛风通络功能。用于失眠多梦，血虚身痛，风湿痹痛；外治皮肤瘙痒［1］。首乌藤

3、的主要有效成分为大黄蒽醌。本文通过对四川、北京、湖南、江西、南京等10个不同地区的商品首乌藤药材制成的超微饮片进行测定，建立指纹图谱，并对首乌藤超微饮片中大黄素的含量进行了测定。　　1仪器与试剂　　1.1仪器　　高效液相色谱仪（岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，紫外检测器SPD-10AVP，岛津色谱工作站），AE240型电子分析天平。　　1.2试剂乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析醇，水为重蒸馏水。　　1.3对照品大黄素（供含量测定用,中国药品生物制品检定所提供）。　　1.4药材　　10批商品首乌藤药材分别购自四川、北京、湖南、江西、南京等地。加工成超微饮片。　　2方法与结果　　2.1供

4、试品溶液的制备取首乌藤超微饮片，取约0.5g，精密称定，加甲醇40ml加热回流提取2次，1h/次，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，置25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。　　2.2对照品溶液的制备取大黄素对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，摇匀，即得。　　2.3色谱条件色谱柱为大连依利特公司HypersilBDSC18柱（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为（A）乙腈-（B）1%冰醋酸,柱温为35℃,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm，进样量为20μl。流动相比例，见表1。表1流动相比例（略）　　2.4方法学考察　　

5、2.4.1精密度实验取同一份首乌藤超微饮片的供试品溶液连续进样5次，比较各共有指纹峰的相对保留时间与相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间与相对峰面积基本一致，RSD＜2%，见表2～3，符合指纹图谱的检测要求［1］。表2精密度实验结果（略）表3精密度实验结果（略）　　2.4.2稳定性实验取同一份首乌藤超微饮片的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，6，8h进样，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜2%，样品在8h内稳定，符合指纹图谱的检测要求。　　2.4.3重复性实验取同一批首乌藤超微饮片样品5份，分别按供试品

6、溶液制备方法制备供试品溶液，进行测定，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜2%，符合指纹图谱的检测要求。　　2.5指纹图谱的建立　　2.5.1共有指纹峰的标定采用相对保留时间标定共有指纹峰，以图谱中大黄素为参照物，将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间(见表4)，计算10批不同地区药材制成的超微饮片指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间，其中9个色谱峰为各样品所有，故标定它们为共有指纹峰。各共有指纹峰的相对保留时间分别为：峰-1（0.1122）、峰-2（0.1559）、峰-3（0

7、.2515）、峰-4（0.2671）、峰-5（0.3808）、峰-6（0.4041）、峰-7（0.4479）、峰-8（0.5350）、峰-S（1.0000）。表410批首乌藤超微饮片各共有峰的相对保留时间（略）　　2.5.2共有指纹峰的相对峰面积以图谱中大黄素为参照物，将各色谱峰峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为各色谱峰的相对峰面积，见表5。表510批首乌藤超微饮片样品部分共有峰的相对峰面积（略）　　2.615批首乌藤超