夏枯草高效液相色谱指纹图谱的研究

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1、夏枯草高效液相色谱指纹图谱的研究作者：杨辉李军郭伟英赵咏【摘要】　　目的：建立夏枯草的指纹图谱分析方法，并对不同产地的夏枯草进行指纹图谱的比较研究。方法：以齐墩果酸为参照，采用高效液相色谱法，色谱柱为HypersilC18，流动相为甲醇：水：醋酸（86：14：0.1），检测波长为208nm，流速为1ml/min。结果：标出10个主要共有峰，方法学考察表明，本研究建立的分析方法有较好的重现性，比较了不同产地夏枯草药材与标准药材指纹图谱的相似性。结论：方法稳定、可靠、简便，为提高夏枯草药材质量控制提供依据。【

2、关键词】夏枯草；高效液相色谱；指纹图谱　　夏枯草为唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisL.的干燥果穗，我国各地均产，主产于江苏、浙江、安徽、河南等地［1］。夏枯草临床应用广泛，药典中载有“清火、明目、散结、消肿”［2］之功效，现代研究表明夏枯草还具有降血脂，降血糖，免疫抑制以及抗肿瘤等作用［3］。目前，市场上夏枯草产地多，质量不一，缺乏统一质量检测标准，通常采用测定其中一、两种化合物含量的方法来进行质量评价，不足以全面反映药材的整体质量。本研究利用高效液相色谱法对夏枯草进行了指纹图谱的研究，结

3、果表明，本方法稳定、可靠、重现性好，可为夏枯草药材质量控制提供有效的参考依据。　　1仪器与试药　　日立高效液相色谱仪，DAD检测器，EZChromElite色谱工作站；KQ100A型超声波清洗器；电子天平。　　夏枯草对照药材及齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。夏枯草药材分别购自各地药材市场和药店，经鉴定为夏枯草药材的干燥果穗。　　甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱：HypersilC18，4.6*250mm，10μm；流动相：甲醇：水：醋酸（86：14

4、：0.1）；检测波长为208nm；流速为1ml/min。　　2.2供试品溶液的制备　　将夏枯草药材择去杂质，60℃恒温干燥，粉碎机粉碎，粉末过40目筛，反复进行，直至药材粉碎全部过筛为止。精密称定夏枯草药材粉末约1g，加入90%甲醇20ml，超声30min，过滤，洗涤，合并滤液和洗液，挥干溶剂，残渣加流动相溶解定容至10.00ml，溶液用微孔滤膜过滤，得夏枯草液，10μl进样。　　2.3流动相的选择　　试验过程中，系统比较了不同配比的甲醇水（80：20；84：16；86：14；88：12）和乙腈水（8

5、0：20；85：15；90：10）及添加剂的用量。结果表明，以甲醇：水：醋酸（86：14：0.1）为流动相系统效果较佳。　　2.4检测波长的选择　　试验采用DAD检测器，在波长190～400nm范围内进行夏枯草样品的吸收情况考察。通过比较各不同保留时间的峰的紫外吸收光谱，得知多数峰的最大吸收在203～210nm范围，少数在230nm附近，综合比较各波长处的色谱图，最终确定208nm作为检测波长。　　2.5参比峰的选择　　为消除测定结果的系统误差，选取与其它组份分离较好、峰形对称、保留时间24.617min

6、的色谱峰作为参比峰（经与标准品色谱图谱及紫外吸收图谱对照，得知此组份为齐墩果酸），以便计算夏枯草药材共同特征组份的相对保留时间和相对含量［4］。　　夏枯草标准药材的色谱图及齐墩果酸标准品色谱图见图1和图2。　　2.6方法学验证　　2.6.1精密度试验同一夏枯草样品液，在相同条件下，重复进样5次，得到色谱图，计算保留时间和峰面积的RSD%。结果见表1。　　2.6.2重现性试验同一夏枯草样品在相同条件下平行提取5份，分别进样，得到色谱图，计算保留时间和峰面积的RSD%。结果见表2。　　2.6.3稳定性试验同一

7、夏枯草样品液分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h进样，计算所得色谱图中各相对应的保留时间和峰面积的RSD%。结果见表3。　　图1夏枯草标准药材色谱图（略）　　图2齐墩果酸标准品色谱图（略）　　表1精密度试验（略）　　表2重现性试验（略）　　表3稳定性试验（略）　　2.7夏枯草HPLC指纹图谱的建立　　按供试品的制备和检测方法，对31份夏枯草药材分别测定色谱图。比较各夏枯草药材的色谱图，结合各组份峰的紫外吸收特征，确定相同组份峰，计算各组份相对保留时间及相对峰面积。　　αi=ti/ts

8、，α为相对保留时间，ts为内参峰保留时间，ti为其它组分保留时间。　　Ar=Ai×100/∑A，Ar为相对面积值，Ai为各组分面积值，ΣA为总峰面积。　　选取10个主要共有峰为特征峰，其面积和占到总面积的99%以上，建立夏枯草样品药材的HPLC相对保留值指纹图谱。结果见表4，其中αi为31种样品谱图中相同组份的相对保留时间值的平均值。　　2.8夏枯草HPLC指纹图谱相似度的计算　　以10批夏枯草对照药材的HPLC图谱为标准，用