魔芋高效液相指纹图谱的建立方法研究.pdf

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1、氨基酸和生物资源2009，31(4)：35—38AminoAcids＆BioticRe,gource$魔芋高效液相指纹图谱的建立方法研究陈永波，马作江，降巧龙，赵青华，滕建勋，王尔惠，杨朝柱，牟方贵，石月明(恩施土家族苗族自治州农业科学院魔芋研究所、组培检测中心湖北，恩施，445000)摘要：利用高效液相色谱建立了以魔芋叶片中水溶性氨基酸为标识的指纹图谱分析方法。分析结果表明：同一品种不同部位的魔芋叶片具有相似的指纹图谱；同一品种、不同育龄的叶片及不同品种相应部位叶片的指纹图谱不同。为此，采用该指纹图谱库分析方法，可以鉴别不同品种、育龄的魔芋

2、资源，为魔芋的新品种选育提供依据。关键词：魔芋；化学指纹图谱；高效液相色谱；水溶性氨基酸中图分类号：Q94文献标识码：A文章编号：1006—8376(2009)04—0035一o4指纹图谱借助了法医“指纹”的概念，即将复杂1．1仪器与药品成分的产品经过适当处理后，采用一定的分析手段，美国Waters2695分离单元+2996二极管矩阵得到能够标示该产品特性的色谱或光谱图，作为衡检测器；Milli—Q超纯水器(美国Milli—Q公司)；量产品质量的标准。近十多年来由于产品特别是生KQ一50B超声波清洗器；真空干燥箱；17种氨基酸物制品中成分的复

3、杂性，仅对某个有效成分或指标标准样品(美国Waters公司提供)；乙腈(色谱纯，天性成分进行定性、定量分析，不能有效控制产品的质津福晨)，甲醇(色谱纯，天津福晨)，乙酸钠一三乙量，而指纹图谱在中药材及中药制剂质量监控方面胺缓冲液(Waters公司提供，使用时取1份加10份得到了广泛的研究和应用¨叫，现已成为国际公认超纯水稀释，超声波脱气1min)。的控制中药或天然药物质量最有效的手段。现阶1．2色谱条件段，指纹图谱的研究和应用已逐渐拓展到生物、食流动相A：140mmol·L乙酸钠一三乙胺缓冲品、化工等领域的各个行业，成为控制产品质量的有液(p

4、H4．95)，流动相B：100％乙腈，C：10％甲醇溶效工具～。液；色谱柱：美国WatersAtlantisdC18柱(3．9mmX魔芋属于天南星科魔芋属植物，其经济器官是150mm，3m)，检测波长：248nm；柱温37oC；流速球茎，主要成分是葡甘聚糖，其次还含有蛋白质、氨0．85ml·min～；运行时间：48min；梯度程序：0基酸、淀粉、粗纤维、无机元素等多种成分，由于葡甘min，100％A；0．5rain，97％A+3％B；15min，96％A聚糖在食品、医药、化工等方面的广泛用途，引起了+4％B；19min，92％A+8％B；27

5、．5min，87％A+人们的高度重视。魔芋资源较为丰富，现中国有2113％B；29．5min，83％A+17％B；31min，78％A+个种，主要分布在湖北、云南、四川、贵州、陕西等省22％B；31．5rain，79％A+21％B；37min，60％B+的部分地区，其中主栽品种为花魔芋和白魔芋。不40％C；40min，100％A。同来源的品种往往在产量、抗病性和品质方面有很1．3样品采集及处理大的差异，为此，我们对魔芋叶片中水溶性氨基酸含魔芋不同部位叶片：花魔芋选4龄芋，分别取顶量与抗病性的关系进行了研究，为魔芋病害防治部小叶(H4—1)、顶

6、部向基部第二叶(H4—2)、第三提供了新的思路。本试验通过对不同魔芋品种、不叶(H4—3)和基部小叶(H4—4)；白魔芋3龄芋顶同取样部位、不同育龄的魔芋叶片的高效液相色谱进部小叶(B3—1)、顶部向基部第二叶(B3—2)和基行分析，为魔芋指纹图谱分析方法的建立提供依据。部小叶(134—3)。同一品种不同育龄叶片：花魔芋组培苗(HZ1一1材料与方法1)、2龄苗顶叶(H2—2)、3龄苗顶叶(H3—3)。以上样品均于2008年8月15日，取自恩施州收稿日期：2009—08—12作者简介：陈永波，男(1967一)大学本科，研究方向：植物组织培养农科

7、院高新科技示范园，每个样品取3株，每株取3和仪器分析E—mail：yongt~c@tom．com片(约10g～20g)。取样后立即于120~C烘箱内杀基金项目：国家科技支撑计划项目(2007BAD73BOO)、湖北省农业科技创新中心创新岗位资金资助项目。青，80％烘干，磨碎，称取样品各0．5g于小烧杯中，·36·陈永波等：魔芋高效液相指纹图谱的建立方法研究加煮沸的超纯水10mL，于80~C烘箱中保温提取1h，取出，溶液用0．45m滤膜过滤，用AccQ．Tag法衍生后上机，收集指纹图谱。2结果与分析2．1方法建立的依据以17种氨基酸标准样品在“

8、1．2”节的色谱条件下所得的色谱图为对照(见图1)，分别标识为1一l5号峰，其中：1号峰为门冬氨酸，2号峰为丝氨酸和谷氨酸混合物，3号峰为甘氨酸和组氨酸混合物，4号