胡黄连对脑缺血大鼠神经生长因子表达的影响

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1、胡黄连对脑缺血大鼠神经生长因子表达的影响【摘要】目的观察缺血再灌注(I/R)模型大鼠脑内神经生长因子(NGF)的变化，探讨胡黄连对神经元的保护作用。方法参照线栓法制作大鼠脑I/R模型，胡黄连干预，免疫组化方法观察皮层、纹状体NGF表达。结果模型组缺血侧皮层区、纹状体区于I/R3d时NGF表达至高峰，7d后逐渐下降，但各时间点与假手术组比较，均有显著差异(P0.01);胡黄连治疗组大鼠脑皮层与纹状体NGF明显高于正常组和模型组(P0.01)。结论胡黄连对脑I/R损伤神经元有保护作用，其机制可能与上调脑

2、内NGF表达有关。【关键词】胡黄连;中药;脑缺血;神经生长因子;大鼠　　【Abstract】ObjectiveToobservetheexpressionofnervegroicreperfusion(I/R)ratbrainandinvestigateitsmechanism.MethodsThecerebralI/Rmodelsinratsadebyintraluminalthreadmethodandinterferedbypicrorhizae.TheexpressionofNGFincor

3、texandstriatuminedbyimmunohistochemistry.ResultsInmodelgroup,theexpressionofNGFpeakedat3dayonischemiccortexandstriatumanddescendedgraduallyafter7days.Butparedtomodelgroup,thereepoint(P0.01).Inratcortexandstriatumofpicrorhizaetreatedgroup,theexpressiono

4、fNGFpositiveneuronsoperatedgroupandmodelgroupsignificantly(P0.01).ConclusionsPicrorhizaecanprotecttheneuronfromI/RinjurybyincreasingtheexpressionofNGFinbrain.　　【Keyedicine;Cerebralischemia;Nervegrol胡黄连甲醇提取物1次，其他两组均每天灌胃3ml生理盐水1次。应用改良线栓法〔3〕，经左侧颈外颈内动脉插线建

5、立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型，模型成功的标志为动物苏醒后，出现左侧Horner征、提尾右前肢内收屈曲，爬行时右侧划圈。模型组分为缺血1.5h再灌注后6h、1、3、7、14、21d组，每组各4只;中药组分为缺血1.5h再灌注后14、21d组;假手术组仅插入尼龙线10mm，其余步骤同模型组。　　1.2脑组织取材各组大鼠术后不同时间点10g/L戊巴比妥钠麻醉，暴露心脏，先以生理盐水200ml经升主动脉冲洗，再以40g/L多聚甲醛200ml灌注固定，持续30min后取脑备用。取材范围为前囟后2.0

6、mm至前囟前3.0mm。脑组织常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，连续冠状切片(片厚5μm)，黏于用多聚赖氨酸处理的切片上，室温保存备用。　　1.3免疫组化NGF免疫组化试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。按说明书操作，标本切片，脱蜡，水化;依次滴加H2O2、山羊血清封闭液、一抗、二抗、SABC后，DAB显色，镜下根据细胞着色情况控制反应时间，双蒸水冲洗终止反应;常规脱水、透明、封片。光镜下观察，细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞。　　1.4统计学处理采用德国欧波同公司VIDAS图像分析系统将每标本的图

7、像输入电脑，对阳性细胞作光密度扫描，获得光密度值。应用SPSS10.0统计软件包进行方差分析和均数间两两比较的t检验，数据用x±s表示。　　2结果　　假手术组脑组织皮层区和纹状体区NGF呈基础水平的表达，模型组缺血侧皮层区、纹状体区于I/R6h后阳性细胞着色开始加深，3d时达到高峰，光密度值与假手术组比较有显著差异(P0.01)，后表达逐渐减弱，但各时间点与假手术组比较，均有显著差异(t=2.41,3.14，3.81，2.53，2.36,t=2.21,2.56,3.25,3.02,2.13,P0.0

8、1);中药组大鼠脑皮层与纹状体NGF明显高于假手术组和模型组(t=3.35,2.56,P0.01)(图1、表1)。表1各组大鼠缺血侧皮层、纹状体NGF的表达与假手术组相比：1)P0.01;与中药组同时间点相比：2)P0.01　　3讨论　　NGF包含α、β、γ三个亚单位，活性区是β亚单位，由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体，与人体NGF的结构具有高度的同源性，生物效应也无明显的种间特异性〔4〕。在神经损伤后，损伤神经元需要神经营养因子以促进表达正