布氏白僵菌高原优良菌株筛选与应用研究

《布氏白僵菌高原优良菌株筛选与应用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、5．3二级液体种子培养基及培养时间筛选目前国内一般采用液固两相法生产布氏白僵菌分生孢子，液体菌种的培养质量及培养时间长短关系到整个双相发酵过程能否顺利进行，能否及时而又保质保量地的为生产提供合格产品。本试验从3组不同的液体培养基配方中筛选出了两种适合布氏白僵菌Bbr05菌株生长的液体培养基配方。其组成分别为：配方二处理2：10％麸皮浸出液，2％葡萄糖；配方三处理5：5％麸皮浸出液，2％蔗糖，0．4％的黄粉虫幼虫组织液，0．05％KH2P04，0．02％MGS04。通过在同种培养基上不同时间产孢量的比较后，得到培养72h是最佳培养时间。在

2、液体种子培养基配方筛选试验一中，得到处理3的配方是相对较好配方。从培养基成分比较发现，为液体种子液产孢提供碳源的营养物质中，麦麸浸出液>马铃薯汁>玉米粉，提供氮源的营养物质中，蛋白胨>酵母膏>尿素。配方中提供的其他微量元素及营养物质，对布氏白僵菌的产孢作用还需要进一步的研究。根据液体种子培养基配方筛选试验一的结果，对培养基配方进行了优化。对麦麸浸出液在培养基中的含量设了两个不同梯度，加入葡萄糖与蔗糖进行比较，处理3中加大了马铃薯汁的含量比例，另外在处理4中加入了动物性蛋白：黄粉虫蛹粉。试验结果显示：麦麸浸出液中所含有的营养物质是布氏白僵

3、菌Bbr05菌株生长所需要的营养物质，添加麦麸浸出液最适合的浓度介于5％和10％之间，具体数值有待进一步研究。试验二虽然增加了配方中马铃薯汁的比例，但并未提高菌株的产孢量，表明马铃薯汁的营养物质不能较好的满足菌株生长及产孢的需要。另外，布氏白僵菌利用葡萄糖的效率高于利用蔗糖的效率，营养成分复杂的基质，更有利于产孢。试验配方二中，处理1中添加的是蔗糖与蛋白胨，处理4中加入的是葡萄糖与黄粉虫蛹粉，两个处理中，提供碳源的蔗糖与葡萄糖、提供氮源的蛋白胨与黄粉虫蛹粉加入的比例相同。从试验结果看，加入蔗糖与蛋白胨基质的培养基配方产孢量高于加葡萄糖与

4、黄粉虫蛹粉的配方，同样含量的蛋白胨与黄粉虫蛹粉的含氮量比较，黄粉虫蛹粉要高于蛋白胨，但试验得到的产孢量结果却显示出加入蛋白胨比加入黄粉虫蛹粉产孢量高的结果。两个处理的培养基成分中，碳氮比例以及营养物质组分均不同，对菌株的产孢量有较大的影响，黄粉虫蛹粉的含氮量较高或其中的某些物质成分是否抑制了菌株的产孢，具体原因还需进一步研究。40样。另外，白僵菌的致病性受到病菌的专化性、害虫的敏感性和环境条件等综合因素的影响。从不同寄主上分离的白僵菌，对麦蝽(EurygasterintegricepsPuton)进行接种试验，结果以椿象菌株接种麦蝽，寄

5、生率为100％，另一种自叶甲分离的白僵菌，接种麦蝽，寄生率为90％，在植物的枯枝落叶下分离的得到的白僵菌接种麦蝽，寄生率只有56％t241。本试验以筛选出来的布氏白僵菌Bbr05菌株为测试菌株，对原生寄主蛴螬及同翅目、鳞翅目的昆虫进行杀虫效果比较试验。布氏白僵菌具有寄主专化性的特点，因此对原寄主的致病力较强，对大栗鳃金龟蒙古亚种幼虫表现出很高的侵染率。另外，在对蛴螬的毒力测试中浸渍与拌土两种施用方法对目标害虫的致病力有差异，浸渍的效果明显好于拌土。这一结果是由于浸渍法已经保证了入土的试验幼虫体上己经黏上了病原菌，同时在湿度上也都具备比较

6、一致的条件；而拌土是先将病原菌混入土中，入土前的金龟幼虫体是无病原菌的，入土后还有一个病原菌粘附的过程，这一过程受菌液在土中混合是否均匀和土壤湿度是否一致等因素的影响，因而毒力效果必然会有所下降。2008年9月中旬，蒲德强用本试验培养的布氏白僵菌高孢子含量的液体培养液及固体布氏白僵菌粉对康定川贝母野生抚育基地川贝母地中的金龟子(主要是大栗鳃金龟蒙古亚种)幼虫进行田间药效试验。试验结果表明：在200m2的调查样地中喷洒孢子浓度为1x108个／ml的布氏白僵菌菌液1500ml，对金龟子的防治效果最好，施药后金龟子的虫口密度大幅度降低，有较好

7、的防治效果，试验还表明：在防治时间上，川I贝母基地5月一8月为雨季，可将防治时间放在这段时间，雨季将更有利于布氏白僵菌的发育，防治效果应该会更好【761。对其他各目昆虫的杀虫效果依次为：同翅目、鳞翅目、鞘翅目。防治效果表现为：甘蓝蚜>菜青虫>松褐天牛幼虫>黄粉虫幼虫。其中以甘蓝蚜最为敏感，对黄粉虫幼虫的效果最差，最终死亡率不到30％，这可能与该菌株的寄主专化性以及试虫对菌株的敏感性有关，黄粉虫幼虫对布氏白僵菌Bbr05菌株的敏感性较低。在杀虫谱试验中，各供试昆虫寄生死亡的时间也有很大差异，甘蓝蚜寄生后死亡时间最短为l天，在侵染3天后出现

8、死亡高峰，菜青虫侵染4天后死亡率也大幅度提高，侵染一周后，甘蓝蚜和菜青虫均全部感染死亡。蛴螬在侵染15天后，死亡率最高为94．4％。而松褐天牛幼虫在接虫感染6天后，黄粉虫幼虫在接虫感染4天后才出现死亡，原因