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时间:2018-11-07
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1、免疫调节剂对1型糖尿病大鼠Foxp3表达的影响【摘要】目的探讨Foxp3在1型糖尿病大鼠模型中的表达和意义及其在来氟米特、百灵胶囊、雷公藤治疗机制中的作用。方法将50只大鼠随机分为5组,每组各10只,Ⅰ~Ⅳ组采用小剂量多次注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠1型糖尿病模型,Ⅴ组为正常对照组。成模后分别给予来氟米特(Ⅰ组)、雷公藤(Ⅱ组)、百灵胶囊(Ⅲ组)灌胃,每天1次,连续2个月,Ⅳ组为非用药糖尿病对照组。荧光定量PCR检测外周血单个核细胞及脾淋巴细胞Foxp3mRNA的表达,免疫组化检测淋巴结和脾组织Foxp3蛋白的表达。结果成模后
2、及给药后Ⅰ~Ⅳ组血糖水平均明显高于Ⅴ组(F=331.894、359.638,P<0.01);给药后,Ⅰ~Ⅲ组胰岛中淋巴细胞浸润程度较Ⅳ组减轻;Foxp3mRNA、Foxp3蛋白表达水平Ⅰ~Ⅳ组均高于Ⅴ组(F=5.895、11.489,P<0.05);与Ⅳ组相比,Ⅱ组血中的Foxp3mRNA升高不明显,脾中显著升高(P=0.028)。结论Foxp3表达的变化可能参与了STZ诱导的1型糖尿病的发生发展;来氟米特、百灵胶囊、雷公藤对1型糖尿病有一定的治疗作用,上调Foxp3基因的表达有可能为雷公藤治疗机制之一,而来氟米特和百
3、灵胶囊未发现该作用。【关键词】免疫调节剂;T淋巴细胞,调节性;叉头蛋白3;糖尿病,1型 [ABSTRACT]ObjectiveToinvestigatetheexpressionsandsignificanceofFoxp3intype1diabeticratmodelanditseffectsontherapyusingleiflunomide(LEF,group1),Tripterygiumodelsadebymultipleinjectionsofloalcontrol.LEFinistration,fortonths.G
4、roup4edicationdiabetescontrolgroup.TheexpressionsofFoxp3mRNAinperipheralbloodandspleeneasuredbyrealtimePCR,andFOXP3proteininlymphoidnodeandspleenbyimmunohistochemistry.ResultsAftermodelpletedandmedication,thebloodglucoselevelsingroups1-4phocyteinfiltrationinpancreati
5、cisletent.TheexpressionsofFoxp3mRNAandproteinRNAinbloodaybeoneofthetherapicmechanismsofTCCACCTGGCTGGGAAGATGGCATTTAMRA3′,产物为106bp。GAPDH上游引物P4:5′TGGTCTACATGTTCCAGTATGACT3′,下游引物P5:5′CCATTTGATGTTAGCGGGATCTC3′,Taqman探针P6:5′FAMCCACGGCAAGTTCAACGGCACAGTTAMRA3′,产
6、物为134bp。PCR反应条件:95℃、10s,95℃、5s,60℃、45s,40个循环。每个样本均做3复孔,取平均值,Foxp3和GAPDH分别在两个管中同时进行反应,结果经内参均一化处理后,以对照组任一例目的基因表达量为参照因子,采用2△△CT法进行分析。 1.2.4免疫组化检测FOXP3蛋白 将石蜡包埋的淋巴结、脾组织切成4μm厚的切片,脱蜡至水,经消除内源性过氧化物酶及抗原复性处理后,进行免疫组化染色,染色参照免疫组化二步法试剂盒说明书操作,苏木精复染后封片。 1.3统计学处理采用SPSS11.5统计软件。结果以±
7、s表示,组间比较采用F检验及LSD检验。 2结果 2.1大鼠成模率和血糖的检测Ⅰ组于第1周、Ⅲ组于第2周各死亡1只,各有1只未成模,共成模8只;Ⅱ组有8只成模,Ⅳ组分别于注射STZ后1周、2周各死亡1只,1只未成模,成模7只;总成模率86.11%。成模后及给药后Ⅰ~Ⅳ组血糖水平均较成模前及Ⅴ组显著升高(F=331.894~359.638,P<0.01),尿糖~,此后一直维持在高水平状态。Ⅰ~Ⅲ组给药后血糖水平较给药前及同期Ⅳ组有所降低,但差异无显著性(P>0.05);Ⅰ~Ⅲ组组间比较无显著性差异(P>0.
8、05)。见表1。表1大鼠成模前后血糖水平(略) 2.2大鼠胰腺病理变化的观察HE染色结果显示,Ⅰ~Ⅳ组大鼠的胰岛变小,胰岛细胞核肿胀、崩解,间质黏液变性,胰岛细胞数减少,纤维组织增生,发生玻璃样变,胰腺间质及胰岛中可见以淋巴细胞和单核细胞为主体的
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