免疫调节剂对1型糖尿病大鼠foxp3表达的影响论文

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1、免疫调节剂对1型糖尿病大鼠Foxp3表达的影响论文【摘要】目的探讨Foxp3在1型糖尿病大鼠模型中的表达和意义及其在来氟米特、百灵胶囊、雷公藤治疗机制中的作用。方法将50只大鼠随机分为5组，每组各10只，Ⅰ～Ⅳ组采用小剂量多次注射链脲佐菌素（STZ）制备大鼠1型糖尿病模型，Ⅴ组为正常对照组。成模后分别给予来氟米特（Ⅰ组）、雷公藤（Ⅱ组）、百灵胶囊（Ⅲ组）灌胃，每天1次，连续2个月，Ⅳ组为非用药糖尿病对照组。荧光定量PCR检测外周血单个核细胞及脾淋巴细胞Foxp3mRNA的表达，免疫组化检测淋巴结和脾组织Foxp3蛋白的表达。结果成模后及给药后Ⅰ～

2、Ⅳ组血糖水平均明显高于Ⅴ组（F=331.894、359.638,P0.01）；给药后.freelRNA、Foxp3蛋白表达水平Ⅰ～Ⅳ组均高于Ⅴ组（F=5.895、11.489,P0.05）;与Ⅳ组相比，Ⅱ组血中的Foxp3mRNA升高不明显，脾中显著升高（P=0.028）。结论Foxp3表达的变化可能参与了STZ诱导的1型糖尿病的发生发展；来氟米特、百灵胶囊、雷公藤对1型糖尿病有一定的治疗作用，上调Foxp3基因的表达有可能为雷公藤治疗机制之一，而来氟米特和百灵胶囊未发现该作用。【关键词】免疫调节剂;T淋巴细胞,调节性;叉头蛋白3;糖尿病,1型［

3、ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionsandsignificanceofFoxp3intype1diabeticratmodelanditseffectsontherapyusingleiflunomide(LEF,group1),Tripterygiumodelsadebymultipleinjectionsofloalcontrol.LEFinistration,.freelonths.Group4edicationdiabetescontrolgroup.TheexpressionsofF

4、oxp3mRNAinperipheralbloodandspleeneasuredbyrealtimePCR,andFOXP3proteininlymphoidnodeandspleenbyimmunohistochemistry.ResultsAftermodelpletedandmedication,thebloodglucoselevelsingroups1-4phocyteinfiltrationinpancreaticisletent.TheexpressionsofFoxp3mRNAandproteinRNAinbloodaybeo

5、neofthetherapicmechanismsofTCCACCTGGCTGGGAAGATGGCATTTAMRA3′，产物为106bp。GAPDH上游引物P4：5′TGGTCTACATGTTCCAGTATGACT3′，下游引物P5：5′CCATTTGATGTTAGCGGGATCTC3′，Taqman探针P6：5′FAMCCACGGCAAGTTCAACGGCACAGTTAMRA3′，产物为134bp。PCR反应条件：95℃、10s，95℃、5s，60℃、45s，40个循环。每个样本均做3复孔，取平均值，Foxp3和GA

6、PDH分别在两个管中同时进行反应，结果经内参均一化处理后，以对照组任一例目的基因表达量为参照因子，采用2△△CT法进行分析。1.2.4免疫组化检测FOXP3蛋白将石蜡包埋的淋巴结、脾组织切成4μm厚的切片，脱蜡至水，经消除内源性过氧化物酶及抗原复性处理后，进行免疫组化染色，染色参照免疫组化二步法试剂盒说明书操作，苏木精复染后封片。1.3统计学处理采用SPSS11.5统计软件。结果以±s表示，组间比较采用F检验及LSD检验。2结果2.1大鼠成模率和血糖的检测Ⅰ组于第1周、Ⅲ组于第2周各死亡1只，各有1只未成模，共成模8只；Ⅱ组有8只成模，Ⅳ组分别

7、于注射STZ后1周、2周各死亡1只，1只未成模，成模7只；总成模率86.11%。成模后及给药后Ⅰ～Ⅳ组血糖水平均较成模前及Ⅴ组显著升高（F=331.894～359.638，P0.01），尿糖～，此后一直维持在高水平状态。Ⅰ～Ⅲ组给药后血糖水平较给药前及同期Ⅳ组有所降低，但差异无显著性（P0.05）；Ⅰ～Ⅲ组组间比较无显著性差异（P0.05）。见表1。表1大鼠成模前后血糖水平（略）2.2大鼠胰腺病理变化的观察HE染色结果显示，Ⅰ～Ⅳ组大鼠的胰岛变小，胰岛细胞核肿胀、崩解，间质黏液变性，胰岛细胞数减少，纤维组织增生，发生玻璃样变，胰腺间质及胰岛中

8、可见以淋巴细胞和单核细胞为主体的炎细胞浸润；Ⅰ～Ⅲ组炎细胞浸润程度较Ⅳ组减轻，Ⅰ、Ⅱ组减轻尤为明显。Ⅳ组胰岛除炎细胞大量浸润外,尚可见β