自拟宝宁丸对小鼠免疫功能的影响

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1、自拟宝宁丸对小鼠免疫功能的影响李玲，马瑜红，欧阳静萍【摘要】　　目的观察自拟方宝宁丸对小鼠免疫功能的影响。方法测定血清抗体效价，并比较宝宁丸与卡介苗对巨噬细胞功能的影响。结果宝宁丸组血清抗体效价明显提高，并可提高巨噬细胞的吞噬作用。结论宝宁丸对小鼠的体液免疫及细胞免疫功能均有增强作用。【关键词】宝宁丸；免疫功能　　TheInfluenceofSelf-masteryBao-NingPillontheImmunityFunctioninMice　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinfluence

2、ofself-masteryBao-NingPillonthefunctionofimmunityinmice.MethodsSerumantibodytitersinedandtheeffectonmacrophagefunctionbetantibodytiterofBao-Ninggroupproved,atthesametime,Bao-NingPillcouldalsoimprovethephagocytosisofmacrophage.ConclusionBao-Ningpillhaspositiveeffectonb

3、othhumoralimmunefunctionandcellularimmunityfunctionofmice.　　Keymunity　　自拟方宝宁丸由醋制鳖甲、生黄芪、生山药、炒莱菔子、炒白术、防风、炒枳实等14味中药组成。本方由我校中医学教授黄德友、马荣华创制，已在一附院、二附院（原南阳张仲景国医学院附属医院）临床应用十余年。观察240余例，除有效预防小儿感冒外，对积滞、厌食证可健脾和胃，改善其消化功能；对腹痛、腹胀症状可行气导滞、缓急止痛；对鼻炎、扁桃体炎可抗菌消炎，防止反复感染〔1〕。为了验证宝宁丸的“安内攘外，扶正祛

4、邪”的临床疗效，我们开展了宝宁丸对小鼠免疫功能影响的实验观察。　　1材料与方法　　1.1药物及制备　　醋制鳖甲、银柴胡、生黄芪、生山药各10g，炒莱菔子、防风、炒枳实各4g，炒白术5g，炒麦芽、炒神曲、鸡内金各6g，由我校二附院中药饮片厂制剂教学科研基地按比例制成散剂。实验前浸泡24h（温度为0～4℃），过滤去渣取上清液，配成浓度为50g/L的溶液备用。　　1.2动物清洁级昆明小鼠，由南阳医学高等专科学校实验动物中心提供，小鼠体质量18～22g，雄性，饲养于清洁级实验室内。　　1.3血清抗体效价测定　　1.3.1实验分组小鼠32只

5、，按体质量配对后随机分为两组，宝宁丸组（B组）和对照组（C组）各16只，B组以50g/L的宝宁丸溶液灌胃，2次/d，C组以生理盐水灌胃，2次/d。　　1.3.2血清抗体的诱导产生用100μg·ml-1牛血清白蛋白作为抗原在1,4,8周对小鼠腹腔注射，第1次注射剂量为0.3ml，第2次注射剂量0.4ml，第3次注射剂量0.5ml。　　1.3.3取血尾静脉取血，用免疫双向扩散法测小鼠血清抗体效价。在1∶16以上时即达到要求，第9周时集体处死。处死前将小鼠禁食24h，以免血脂过高。用断头法处死小鼠，每只小鼠分别取血置于1ml离心管中。常

6、温静置1h，4℃过夜，使血块收缩，将血块自容器壁分离，将血清全部倾入离心管。4℃下2500r/min离心30min，取上清部分与前面血清混合，3000r/min离心5min取上清液，即为所需血清。　　1.3.4血清抗体效价测定准备10支试管，分别加入生理盐水0.5ml。在第1管内加小鼠血清0.5ml，混匀后吸出0.5ml注入第2管，同样混匀后吸出0.5ml于第3管，依此类推，稀释到第9管，第9管混匀后弃去0.5ml，第10管不加小鼠血清，只加0.5ml生理盐水。第1到第9管的稀释倍数分别为2，4，8，16，32，64，128，25

7、6，512倍。每管中再加入100μg·ml-1牛血清白蛋白0.5ml。混匀后室温放置60min，以出现明显凝集的试管的稀释倍数为血清抗体效价。　　1.4小鼠腹腔巨噬细胞功能测定　　1.4.1鸡红细胞悬液的制备〔2〕于无菌操作下，自鸡翼下静脉采血，置Alsever's溶液中，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。临用时，用生理盐水洗涤3次，离心弃去上清液，用生理盐水配成20ml/L(V/V)。　　1.4.2实验分组取小鼠30只，按体质量配对后随机分为宝宁丸组(B组)、卡介苗组(K组)和生理盐水组(C组)，每组各10只，分笼饲养。按表1给药。表

8、1小鼠腹腔巨噬细胞功能测定动物分组及给药情况（略）4周后，每鼠腹腔注射20ml/L(v/v)鸡红细胞悬液1.0ml。间隔30min，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2.0ml，转动鼠板，吸出腹腔洗液1.0