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时间:2018-11-16
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1、自拟宝宁丸对小鼠免疫功能的影响论文李玲,马瑜红,欧阳静萍【摘要】目的观察自拟方宝宁丸对小鼠免疫功能的影响。方法测定血清抗体效价,并比较宝宁丸与卡介苗对巨噬细胞功能的影响。结果宝宁丸组血清抗体效价明显提高,并可提高巨噬细胞的吞噬作用。结论宝宁丸对小鼠的体液免疫及细胞免疫功能均有增强作用。【关键词】宝宁丸;免疫功能TheInfluenceofSelf-masteryBao-NingPillontheImmunityFunctioninMiceAbstract:ObjectiveToinvestigatet
2、heinfluenceofself-masteryBao-NingPillonthefunctionofimmunityinmice.MethodsSerumantibodytitersinedandtheeffectonmacrophagefunctionbetantibodytiterofBao-Ninggroupproved,.freeletime,Bao-NingPillcouldalsoimprovethephagocytosisofmacrophage.ConclusionBao-Ning
3、pillhaspositiveeffectonbothhumoralimmunefunctionandcellularimmunityfunctionofmice.Keymunity自拟方宝宁丸由醋制鳖甲、生黄芪、生山药、炒莱菔子、炒白术、防风、炒枳实等14味中药组成。本方由我校中医学教授黄德友、马荣华创制,已在一附院、二附院(原南阳张仲景国医学院附属医院)临床应用十余年。观察240余例,除有效预防小儿感冒外,对积滞、厌食证可健脾和胃.freell-1牛血清白蛋白作为抗原在1,4,8周对小鼠腹腔注射,
4、第1次注射剂量为0.3ml,第2次注射剂量0.4ml,第3次注射剂量0.5ml。1.3.3取血尾静脉取血,用免疫双向扩散法测小鼠血清抗体效价。在1∶16以上时即达到要求,第9周时集体处死。处死前将小鼠禁食24h,以免血脂过高。用断头法处死小鼠,每只小鼠分别取血置于1ml离心管中。常温静置1h,4℃过夜,使血块收缩,将血块自容器壁分离,将血清全部倾入离心管。4℃下2500r/min离心30min,取上清部分与前面血清混合,3000r/min离心5min取上清液,即为所需血清。1.3.4血清抗体效价测定准
5、备10支试管,分别加入生理盐水0.5ml。在第1管内加小鼠血清0.5ml,混匀后吸出0.5ml注入第2管,同样混匀后吸出0.5ml于第3管,依此类推,稀释到第9管,第9管混匀后弃去0.5ml,第10管不加小鼠血清,只加0.5ml生理盐水。第1到第9管的稀释倍数分别为2,4,8,16,32,64,128,256,512倍。每管中再加入100μg·ml-1牛血清白蛋白0.5ml。混匀后室温放置60min,以出现明显凝集的试管的稀释倍数为血清抗体效价。1.4小鼠腹腔巨噬细胞功能测定1.4.1鸡红细胞悬液的制
6、备[2]于无菌操作下,自鸡翼下静脉采血,置Alsever's溶液中,高压蒸气灭菌,4℃冰箱保存。临用时,用生理盐水洗涤3次,离心弃去上清液,用生理盐水配成20ml/L(V/V)。1.4.2实验分组取小鼠30只,按体质量配对后随机分为宝宁丸组(B组)、卡介苗组(K组)和生理盐水组(C组),每组各10只,分笼饲养。按表1给药。表1小鼠腹腔巨噬细胞功能测定动物分组及给药情况(略)4周后,每鼠腹腔注射20ml/L(v/v)鸡红细胞悬液1.0ml。间隔30min,颈椎脱臼处死动物,将其仰位固定于鼠板上,正中剪开
7、腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2.0ml,转动鼠板,吸出腹腔洗液1.0ml,平均分滴于2片载玻片上,移置(37±1)℃孵箱温育30min,于生理盐水中漂洗,以除去未贴片细胞。晾干,以1∶1丙酮甲醇溶液固定,40ml/L(V/V)Gimsa-磷酸缓冲液染色3min,再用蒸馏水漂洗,凉干。镜检,计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数,计算吞噬百分率和吞噬指数。计算公式为:吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞(吞及未吞的)×100%,吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/200个
8、巨噬细胞(吞及未吞的)÷2。2结果2.1血清抗体效价通过对两组32管小鼠血清抗体效价的测定,得到B组血清中抗体效价明显高于C组。B组血清抗体效价以1∶128为主,占样本总量的62.50%;其次为1∶256,占样本总量的18.75%;再次为1∶64,占样本总量的12.50%,1∶512,占样本总量的6.25%。C组血清抗体效价以1∶32为主,占样本总量的56.25%;其次为1∶64,占样本总量的25.00%,再次为1∶16,占样本总量的18.75%(见表2
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