苦参碱对小鼠免疫功能的影响论文

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1、苦参碱对小鼠免疫功能的影响论文.freela公司产品;二甲基亚砜（DMSO）广东汕头西陇化工厂产品;RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品;小牛血清（NBS）北京鼎国生物技术发展中心提供;其余试剂均为分析纯。1.3仪器酶标仪，奥地利TECAN公司产品:CO2培养箱，日本SANYO公司产品;倒置显微镜，日本OLYMPUS公司产品。2实验方法2.1苦参碱体外对正常小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响2.1.1正常小鼠脾淋巴细胞悬液的制备无菌取正常小鼠脾脏，常规方法制备脾细胞悬液，用10%NBS-RBMI1640培养液调整细胞浓度5×106.ml［3］。2.1.2T、B淋巴细胞增殖能

2、力的测定将5×106.ml的脾细胞悬液加入96孔培养板中，100μl.孔，然后每孔加入终浓度为5μg.ml的ConA50μl，另一块培养板每孔加入使终浓度为10ug.ml的LPS50μl，然后每孔加入不同浓度的药液50μl，每个浓度设5个复孔，并设空白对照孔和阴性对照孔，将96孔培养板置于37℃5%CO2培养箱中培养48h后，每孔加入5mg.mlMTT10μl，继续培养4h，取出96孔板，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，置于微量振荡器上振荡10min，酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映淋巴细胞增殖能力的强弱［4］。2.2苦参碱体外

3、对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响2.2.1IL-2的粗提常规方法制备小鼠脾细胞悬液，调细胞浓度5×106.ml，加入24孔培养板，每孔1ml，再加入终浓度为3μg.ml的ConA0.5ml及不同浓度药液1ml，置37℃5%CO2培养箱中培养48h，2000r.min离心10min，取上清液，经0.22um微孔滤器过滤，得粗提IL-2的待测品，分装-20℃保存待测。2.2.2IL-2活性的测定常规法制备小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔培养板，每孔50ul，使细胞终浓度为1×105.ml，再加入终浓度为3μg.ml的ConA50ul及不同稀释度的待测样品100μl，以培养液作为阴性对

4、照，置于37℃5%CO2培养箱中培养24h后，每孔加入5mg.mlMTT10μl，继续培养4h，取出96孔板，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，置于微量振荡器上振荡10min，酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映IL-2活性的强弱［3］。2.3苦参碱体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响2.3.1IL-1的粗提常规方法制备24孔板巨噬细胞单层，每孔加入终浓度为10ug.ml的LPS0.5ml，以激活巨噬细胞，同时每孔加入不同浓度的试药1ml，培养48h后收获上清，得诱生的IL-1粗品，-20℃保存待测［3］。2.3.2IL-1活

5、性的测定常规法制备107/ml小鼠胸腺细胞悬液，加入96孔板，每孔0.1ml，同时加入不同稀释度的IL-1待测上清液0.1ml，终浓度为2μg.ml的ConA0.1ml，每个浓度5个复孔，以培养液作为阴性对照，置37℃5%CO2培养箱中培养68h后，每孔加5mg.mlMTT10μl，继续培养4h，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，微量振荡器振荡10min，酶标仪570nm处测吸光度A值。吸光度大小反映IL-1活性的强弱［4、5］。2.4统计分析采用SPSS10.0统计软件进行F检验和q检验。统计结果用（ˉx±s）表示。3结果3.1对小鼠T、B淋

6、巴细胞增殖的影响见表1、表2。表1体外对ConA非特异性刺激小鼠T淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P0.05，**P0.01，***P0.001。表2体外对LPS非特异性刺激小鼠B淋巴细胞增殖的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P0.05，**P0.01，***P0.001从表1可见苦参碱在0.5mg.ml、0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。从表2可见苦参碱在4个浓度均可明显抑制T淋巴细胞增殖，且呈剂量依赖关系。3.2体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响见表3。表3体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响（

7、略）注:与阴性对照组相比，*P0.05，**P0.01，***P0.001从表3可见苦参碱在0.5mg.ml，0.25mg.ml和0.05mg.ml3个浓度可明显抑制脾细胞释放IL-2，且呈剂量依赖关系。3.3体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响见表4。表4体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞细胞释放IL-1的影响（略）注:与阴性对照组相比，*P0.05，**P0.01，***P0.001。从表4可见苦参碱在0.25mg.ml浓度可明显抑制脾细胞释放IL-2，在其它浓度亦呈抑制趋势，但未见明显