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1、人工虫草多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响【摘要】目的：以人工虫草多糖作为受试物,观察其对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响.方法：采用碳粒廓清法、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法及溶血素试验法,观察人工虫草多糖对免疫功能低下小鼠非特异性和特异性免疫功能的影响.结果：人工虫草多糖140mg/kg能显著地增加小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数α,增强氢化可的松诱导的免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能；在迟发型变态反应实验中,140mg/kg，70mg/kg虫草多糖剂量组能显著地增加小鼠耳肿胀度,提示虫草多糖可增强环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠迟发性变态反应.140mg/kg虫草多糖剂量组能显著提高小鼠
2、溶血素水平,提示虫草多糖可增强环磷酰胺诱导免疫功能低下小鼠的特异性体液免疫功能.结论：人工虫草多糖对免疫功能低下小鼠非特异性和特异性免疫功能具有一定增强作用.【关键词】冬虫夏草人工虫草多糖迟发型变态反应溶血素碳粒廓清疫抑制0引言冬虫夏草是虫草真菌（Cordycepssinensis）的子座及其寄主蝙蝠蛾（Hepialusarmoricanus）幼虫体的复合物.冬虫夏草是一种名贵的强壮滋补中药,由于有其严格的寄生性及特殊的生长地理条件，因此产量有限，人工培养虫草菌丝体的成功，大大促进和加快了药理方面的研究.虫草对免疫及血液系统有调节作用,对心脏损伤有保护和防治作用［1-3］.我们从人工虫草菌丝体
3、中分离提取有效成分虫草多糖，观察了人工虫草多糖对免疫功能低下小鼠非特异性和特异性免疫功能的影响.1材料和方法1.1材料ICR小鼠150只，体质量18～22g，雌雄各半（西安交通大学实验动物室）；人工虫草（华东制药股份有限公司；人工虫草多糖(polysaccharidefromculturedCordycepssinensis,PCCS)采用水提醇沉法提取多糖，应用苯酚硫酸法测定多糖，含量约为40%;云芝多糖（polysaccharidefromCoriolusversicolor,PCV)购自南京老山制药厂；氢化可的松（上海信谊药厂）；注射用环磷酰胺（Cytoxan,CTX）购自上海华联制药
4、有限公司；印度墨汁（BlackIndianInk）购自北京西中化工厂,使用前用生理盐水稀释3倍,超声处理后离心,弃去沉淀物；二硝基氟苯（Dinitrofluorobenzene,DNFB）购自吴江市青云精细化工厂，使用前配成10g/L溶液,称取DNFB50mg,溶于预先配好的丙酮麻油溶液(丙酮麻油1∶1)5mL中；羊红细胞（SRCB）购自西安交通大学,临用前用生理盐水配制成200mL/L；都氏试剂:NaHCO31.0g，KFe40.2g，K0.05g,用蒸馏水溶解至1L,均为市售分析纯.1.2方法1.2.1对免疫低下小鼠非特异性免疫功能影响-碳粒廓清法［4］将ICR小鼠随机分为5组,每组10
5、只.即140mg/kgPCCS，70mg/kgPCCS剂量组，1g/kgPCV阳性对照组，模型组和正常对照组（给予等量5g/L羧甲基纤维素钠溶液）.上述各组均灌胃给药,除正常对照组外，其余各组皮下注射氢化可的松50mg/kg,1次/d，连续6d,造成免疫功能低下模型,同时给予药物,连续7d.于末次给药后0.5h,于各鼠尾静脉注射经稀释的印度墨汁5μL/g,于1(t1)和5(t5)min后,分别从眼眶静脉取血20μL,加到1g/LNa2CO3溶液2mL中摇匀,用分光光度计在680nm处测定t1和t5的吸光度值（A1，A5）,计算廓清指数K.之后，将小鼠放血处死，取肝脏及脾脏称质量，计算吞噬指数α
6、.廓清指数K=(logA1-logA5)/(t5-t1)=log(A1/A5)/4.吞噬指数α=体质量/肝脾重×K1/3.1.2.2对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠迟发型变态反应的作用［5］取小鼠50只，分组及灌药同1.2.1.将每鼠腹部去毛,范围为3cm×3cm,将10g/LDNFB均匀涂抹于上,涂抹当日除正常对照组外各组腹腔注射CTX50mg/kg,隔日加强1次.末次给药后0.5h,将10g/LDNFB均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击,使局部产生迟发型变态反应（水肿）,攻击后24h,脱颈椎处死小鼠,剪下左右耳壳,用打孔器取下直径8mm的耳片,称质量,以左右耳片重量之差作为肿胀度,比较各组的差别.
7、1.2.3对环磷酰胺诱导免疫功能低下小鼠的特异性体液免疫功能的作用［6］ICR小鼠分组及剂量设置同1.2.1,上述各组均灌胃给药,1次/d,连续4d.给药第1日腹腔注射200mL/LSRBC0.2mL/只，免疫当日除正常对照组外各组肌注CTX20mg/kg,连续3d.免疫后第4日摘眼球取血，分离血清，将血清稀释500倍后供测定.反应管内依次加入经稀释的血清1mL，50mL/LSRBC0.5mL,1
