大鼠延髓背角浅层内cgrp阳性终末与gaba及甘

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1、大鼠延髓背角浅层内CGRP阳性终末与GABA及甘【关键词】甘氨酸关键词:GABA;甘氨酸;延髓;免疫电镜;大鼠摘要:目的观察大鼠延髓背角（MDH，三叉神经脊束核尾侧亚核）浅层（Ⅰ，Ⅱ层）内降钙素基因相关肽（CGRP）阳性终末与γ-氨基丁酸（GABA）能和甘氨酸（Gly）能神经元的突触联系.方法包埋前GABA或Gly免疫组织化学染色方法结合包埋前CGRP免疫金标记电镜技术.结果GABA或Gly阳性产物广泛分布于神经元胞体、轴突和树突内，CGRP阳性标记主要见于无髓和薄髓轴突内.约53%和51%的CGRP阳性轴突终末分别与GABA和Gly

2、阳性神经元的胞体或树突形成非对称性突触，其中的多数为轴-树突触，轴-体突触较少.结论含CGRP的初级传入纤维直接与MDH浅层内的GABA能及Gly能抑制性中间神经元形成突触联系.　　Keyedullaoblongata;microscope，immunoelectron;rats　　Abstract:AIMToinvestigatethesynapticconnectionsbe-tmunoreactive（CGRP-ir）terminalsandγ-aminobutyricacid（GABA）-andglycine（Gly）-irn

3、euronsinthesuperficiallayers（laminaeIandII）ofratmedullarydorsalhorn（MDH）.METHODSPre-embeddingimmunohistochemicaldetectionofGABAorGly，binedbeddinggoldmarkingtechnique，munoreactivity.RESULTSDenselystainedGABA-andGly-irneuronalcellbodiesasinaeⅠandⅡoftheMDH，munoreactivityai

4、nlyyelinatedandunmyeli-natedaxonsandtheirterminals.About53%ofCGRP-irter-minalsmadeasymmetricsynapsesinalsajorityofinorityaticsynaps┐es.CONCLUSIONCGRP-containingprimaryafferentfibersmakedirectsynapticconnectionsinaeⅠandⅡoftheratMDH.　　0引言　　延髓背角（MDH，三叉神经脊束核尾侧亚核）的浅层（Ⅰ，Ⅱ层）由投

5、射神经元和中间神经元构成，主要接受传递面口部伤害性信息的初级传入纤维［1，2］.MDH浅层内有γ-氨基丁酸（GABA）和甘氨酸（Gly）能的抑制性中间神经元，它们在外周伤害性信息向中枢传递的过程中，发挥着重要的调控作用.P物质（SP）和降钙素基因相关肽（CGRP）是三叉神经节发出的无髓或薄髓初级传入纤维的神经活性物质，主要参与伤害性信息向MDH的传递［3，4］.我们以往的研究观察到含SP的初级传入终末与GABA和Gly能神经元形成突触联系［5］.本研究用包埋前GABA或Gly免疫组化染色方法结合包埋前CGRP免疫金标记的电镜技术，对M

6、DH浅层内CGRP阳性终末与GABA及Gly能抑制性中间神经元的突触联系进行了观察.　　1材料和方法　　1.1材料①实验动物SD大鼠8只，体质量200～250g，雌雄不拘，由第四军医大学实验动物中心提供;②实验仪器PhilipsCM100电子显微镜.　　1.2方法　　1.2.1取材在ip戊巴比妥钠（100mg・kg-1）的深麻醉状态下开胸，经左心室插管至升主动脉，先用100mL生理盐水冲洗血液，再灌注500mL含40g・L-1多聚甲醛、2g・L-1苦味酸和0.5g・L-1戊二醛的

7、0.1mol・L-1磷酸缓冲液（PB;pH7.3），持续1.5～2.0h.灌注完毕立即取脑并置于上述新鲜固定液中后固定4～6h.振动切片机冠状切脑干，片厚40μm，切片分2组收集.经冷冻保护后，用液氮对切片进行冻融，以增强抗体穿透细胞膜的能力.再将切片置入含0.2L・L-1正常羊血清的0.05mol・L-1Tris盐酸缓冲盐（TBS）溶液中孵育0.5h，以阻断非特异性免疫反应.　　1.2.2免疫细胞化学染色切片经0.05mol・L-1磷酸缓冲盐溶液（PBS;pH7.4）漂洗后，用

8、ABC法对第1组切片在室温下进行GABA/CGRP的免疫细胞化学染色，步骤如下:将切片在豚鼠抗GABA血清（1∶1000;Chemicon）和兔抗CGRP血清（1∶1000;Incstar）的混合液中孵育24h;用结合有