大鼠中脑导水管周围灰质内gaba与阿片μ受体共存

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1、大鼠中脑导水管周围灰质内GABA与阿片μ受体共存【关键词】GABA关键词:GABA;受体，阿片样，μ;水管周灰质;显微镜检查，共焦;免疫组织化学;大鼠摘要:目的观察中脑导水管周围灰质（PAG）内是否存在γ-氨基丁酸（GABA）与阿片μ受体（MOR）共存神经元.方法免疫荧光组织化学双重染色技术，染色结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察.结果GABA阳性神经元主要见于PAG中、尾段内侧区和腹外侧区，阳性神经元多散在分布并多为小型，中型者较少;散在分布的MOR阳性神经元主要见于PAG中、尾段的腹外侧区，多为中、小型神经

2、元;散在并同时呈GABA和MOR双重染色阳性的中、小型神经元主要见于PAG中、尾段的腹外侧区.结论PAG内有GABA与MOR共存的神经元，提示内源性阿片物质对PAG内的GABA能神经元可能有调控作用.　　Keyu;periaqueductalgray;microscopy，confocal;immunohis-tochemistry;rats　　Abstract:AIMToobserveinobutyricacid（GABA）andμopioidreceptor（MOR）co-existinneuronsof

3、theperiaqueductalgray（PAG）intherat.METHODSIm-munofluorescenthistochemicaldouble-stainingtechniqueicroscope.RESULTSGABA-immunoreactive（GABA-IR）neuronsainlyseeninthemedialandven-trolateralsubregionsatthemiddleandcaudallevelsofthePAG.Mostofthesparselydistribut

4、edGABA-IRneuronsall-sizedandthenumberofmedium-sizedGABA-IRneuronsall.ScatteredMOR-IRneuronsainlyobservedintheventrolateralsubregionatthemiddleandcau-dallevelsofthePAG.MostoftheMOR-IRneuronsall-andmedium-sized.Small-andmedium-sizedneuronssimultaneouslyshoidd

5、leandcau-dallevelsofthePAG.CONCLUSIONThereareGABAandMORco-existingneuronsinthePAG.Thepresentresultssuggestthatendogenousopioid-likesubstancesmightregu-lateGABAergieuronsinthePAG.　　0引言　　以往的研究证明，中脑导水管周围灰质（PAG）内5-羟色胺（5-HT）能下行投射系统在调控伤害性信息向中枢的传入过程中发挥着重要作用，而γ-氨基丁

6、酸（GABA）对5-HT能神经元具有抑制性调控作用［1-4］.有人曾报道激活中枢神经系统内的阿片μ受体（μopioidreceptor，MOR）具有直接调节GABA能神经元活动的作用［5］.激活MOR后调节GABA能神经元活动的结果能使PAG的下行投射神经元摆脱GABA能神经元的抑制（disinhibition，脱抑制）并发挥镇痛作用［6］.但PAG内的GABA能抑制性神经元是否呈MOR阳性，尚缺乏直接的形态学证据.本研究用免疫荧光组织化学双重染色技术，在激光扫描共聚焦显微镜下对PAG内GABA与MOR共存的

7、神经元进行了观察.　　1材料和方法　　1.1材料成年雄性SD大鼠8只（第四军医大学实验动物中心提供），体质量200～250g.戊巴比妥钠（4g・L-1）经腹腔深麻下开胸，经左心室插管至升主动脉，先以150mL的9g・L-1生理盐水冲洗，再用含40g・L-1多聚甲醛和2g・L-1苦味酸的0.1mol・L-1磷酸缓冲液（PB，pH7.4）500mL灌注固定，灌注完毕立即取脑，置于上述新鲜固定液后固定4～6h，再移入含300g・L-

8、1蔗糖的PB中至组织块沉底（4℃）.将中脑用恒冷箱作连续冠状切片，片厚15μm，切片隔2取1，分3组收集.用0.01mol・L-1的PBS（pH7.4）充分清洗切片.　　1.2方法按ABC方法对第1组切片进行免疫组织化学染色，具体步骤如下:①入兔抗GABA血清（1∶1000;Chemicon）与豚鼠抗MOR血清（1∶1000;Ding等［7］）混合液，室温孵育18～24h;②入Biot