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时间:2018-11-04
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1、大鼠延髓背角和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝【摘要】目的研究大鼠延髓背角和脊髓背角浅层内蛋白激酶Cγ亚单位(PKCγ)阳性神经元向中缝隐核(NRO)的投射。方法应用荧光金(FG)逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记方法,观察大鼠延髓背角和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝隐核的投射。结果将FG注入NRO,在延髓背角和脊髓背角的Ⅰ~Ⅲ层内可见FG逆标神经元;PKCγ阳性神经元主要分布于延髓背角和脊髓背角的Ⅱ层内侧部及Ⅱ、Ⅲ层交界处,Ⅰ、Ⅲ层内较少;延髓背角Ⅰ层和脊髓背角Ⅰ~Ⅲ层可观察到FG逆标并呈
2、PKCγ阳性的双标神经元。结论延髓背角和脊髓背角浅层向NRO投射的神经元为PKCγ阳性神经元,其在向NRO传递信息的通路中可能发挥重要作用。【关键词】蛋白激酶C中缝隐核延髓背角脊髓背角荧光免疫测定大鼠[ABSTRACT]ObjectiveToinvestigatetheprojectionsofproteinkinaseCγisoform(PKCγ)immunoreactiveneuronsfromthemedullaryandspinaldorsalhornstothenucleusrapheobscurus(N
3、RO)inrat.MethodsThedoublelabelingmethodoffluorogold(FG)retrogradetracingbinedmunofluorescencehistochemicalstaininginaeⅠ—Ⅲofthemedullaryandspinaldorsalhorns.PKCγimmunoreactiveneuronsainlyobservedintheinnerpartoflaminaⅡandtheborderregionbetinaeⅡandⅢ,inaeⅠandⅢ,o
4、nlyafemunoreactiveneuronseFG1abeledneuronsinlaminaⅠofthemedullaryandlaminaeⅠ—ⅢofthespinaldorsalhornalsoexhibitedPKCγimmunoreactivity.ConclusionThepresentresultsindicatethatPKCγcontainingneuronsinthemedullaryandspinaldorsalhornsprojecttotheNRO,suggestingthatPK
5、CγmightbeinvolvedinthetransmissionofnociceptiveinformationfromthemedullaryandspinaldorsalhornstotheNRO.[KEYedullarydorsalhorn;spinaldorsalhorn;fluoroimmunoassay;rats延髓背角和脊髓背角浅层(Ⅰ、Ⅱ层)是外周疼痛信息向中枢传递的门户,在疼痛信息的传递和调控过程中发挥着重要作用。中缝隐核接受延髓背角和脊髓背角上行投射神经元的传入信息,经整合后再启动下行抑制系
6、统,对延髓背角和脊髓背角神经元发挥选择性抑制作用[1]。蛋白激酶C(PKC)是重要的细胞内信号转导分子,在脊髓背角浅层主要定位于兴奋性神经元[2],并参与外周伤害性信息的传递[3,4]。PKC的γ亚单位(PKCγ)是否只是存在于延髓背角和脊髓背角浅层向中缝隐核(NRO)的投射神经元中,至今缺乏形态学依据。本研究应用荧光金(FG)逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学相结合的双标记方法,观察延髓背角和脊髓背角浅层内PKCγ阳性神经元向NRO的投射。1材料与方法1.1实验动物成年SD大鼠12只(180~230g),雌雄不拘
7、。1.2实验方法1.2.1逆行追踪动物在戊巴比妥钠腹腔注射(40mg/kg)麻醉下,根据PAXINOS和)的微量注射器将0.15μL双蒸水配制的40g/LFG经压力缓慢注入NRO,注射时间15~20min,注毕留针10min。注射点的坐标为耳间线后3.72mm,中线深度10.60mm。1.2.2标本制备动物存活6~7d后,在戊巴比妥钠腹腔注射(100mg/kg)深麻醉下,经左心室插管至升主动脉,先用100mL生理盐水快速冲洗血液,再用500mL含40g/L多聚甲醛的磷酸缓冲液(PB0.1mol/L,pH7.4)灌注
8、固定30min以上。灌注完毕立即取出脑干和脊髓,移入含300g/L蔗糖的PB内直至组织块沉底(4℃)。将注射部位、脑干尾段和脊髓颈段做冷冻连续冠状切片,切片厚30μm,脑干尾段和脊髓颈段的切片隔3张取1张,分为4套收集于磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/L,pH7.4)内。将第1、2套切片分别裱于经明胶处理的载玻片上,用于FG注射区的范围和FG标记神经元分
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