大鼠延髓和脊髓背角内pkcγ阳性神经元向中缝苍白

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1、大鼠延髓和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝苍白【摘要】目的研究大鼠延髓背角和脊髓背角浅层内蛋白激酶C的γ亚单位(PKCγ)阳性神经元向中缝苍白核(NRP)的投射。方法采用荧光金(FG)逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记方法。结果将FG注入NRP，在延髓和脊髓背角的Ⅰ～Ⅲ层内可见FG逆标神经元；PKCγ阳性神经元主要分布于延髓和脊髓背角的Ⅱ层内侧部及Ⅱ、Ⅲ层交界处，Ⅰ、Ⅲ层内较少；延髓背角Ⅰ层和脊髓背角Ⅰ～Ⅲ层可观察到FG逆标并呈PKCγ阳性的双标神经元。结论延髓和脊髓背角浅层向NRP投射的神经元是PKCγ阳性神经元，提示其在向NRP传递的信息通路中可能发挥重

2、要作用。【关键词】蛋白激酶C中缝核延髓脊髓免疫组织化学大鼠［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheprojectionsofproteinkinaseCγisoform(PKCγ)immunoreactiveneuronsfromthemedullaryandspinaldorsalhornstothenucleusraphepallidus(NRP)inrat．MethodsThedoublelabelingmethodoffluorogold(FG)retrogradetracingbinedunofluorescencehistochemi

3、calstainingforPKCγinaeⅠ-Ⅲofthemedullaryandspinaldorsalhorns．PKCγimmunoreactiveneuronsainlyobservedintheinnerpartoflaminaⅡandtheborderregionbetinaeⅡandⅢ，inaeⅠandⅢ，onlyafemunoreactiveneuronseFGlabeledneuronsinlaminaⅠofthemedullaryandlaminaeⅠ-ⅢofthespinaldorsalhornalsoexhibitedPKCγimmunoreacti

4、vity.ConclusionThepresentresultsindicatethatPKCγcontainingneuronsinthemedullaryandspinaldorsalhornsprojecttotheNRP,suggestingthatPKCγmightbeinvolvedinthetransmissionofnociceptiveinformationfromthemedullaryandspinaldorsalhornstotheNRP.［KEYedullaoblongate;spinalcord;immunohistochemistry;rats延髓

5、背角(也称三叉神经脊束核尾侧亚核)和脊髓背角浅层(Ⅰ、Ⅱ层)是外周痛信息向中枢传递的门户，在痛信息的传递和调控过程中发挥着重要作用。中缝苍白核(NRP)接受延髓和脊髓背角上行投射神经元的传入信息，经整合后再启动下行抑制系统，对延髓和脊髓背角神经元发挥选择性抑制作用［1］。蛋白激酶Cγ亚单位(PKCγ)是重要的细胞内信号转导分子，在脊髓背角浅层主要定位于兴奋性神经元并参与外周伤害性信息的传递［2～4］。PKCγ是否存在于延髓和脊髓背角浅层向NRP的投射神经元，至今缺乏形态学依据。本研究应用荧光金逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学相结合的双标记方法，观察了延髓和脊髓背角浅层内PKC

6、γ阳性神经元向NRP的投射情况。1材料与方法1．1实验动物成年SD大鼠12只（180～230g），雌雄不拘。1．2逆行追踪所有大鼠在戊巴比妥钠40mg/kg体质量腹腔注射麻醉下，根据Paxinos和）的微量注射器，将0.15μL双蒸水配制40g/LFG缓慢注入NRP，注射时间15～20min，注毕留针10min。注射点的坐标为耳间线后1.72mm，中线旁开0mm，深度10.8mm。1．3灌注固定和切片大鼠存活6～7d后，在戊巴比妥钠腹腔注射（100mg/kg）深麻醉下，经左心室插管至升主动脉，先用100mL生理盐水快速冲洗血液，再用500mL含40g/L多聚甲醛的磷酸缓冲液（P

7、B，0.1mol/L，pH7.4）灌流固定30min以上。灌注完毕立即取出脑干和脊髓，移入含300g/L蔗糖的PB内直至组织块沉底（4℃）。将注射部位、脑干尾段和脊髓颈段做冰冻连续冠状切片，片厚30μm，脑干尾段和脊髓颈段的切片隔3张取1张，分为4套收集于磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/L，pH7.4）内。将第1、2套切片分别裱于经明胶处理的载玻片上，用于FG注射区范围和FG标记神经元分布的观察以及Nissl染色。1．4免疫组织化学法将第3套切片经PBS充分漂洗后，进行PKCγ的免疫荧