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时间:2018-10-30
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1、HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量整理。:王少妹罗杰利幼梁敬仪贝伟剑【摘要】目的建立脑心清片浸膏中原儿茶酸含量的测定方法。方法采用HPLC方法,色谱柱为依力特C18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈甲醇0.3%H3PO4为流动相进行梯度洗脱,检测波长:260nm,流速:1mL/min,柱温:30℃。结果回归方程为A=2508.6m+63.241,r=0.9991,线性范围为0.1548~2.4768μg;平均回收率为97.36%,RSD为1.21%。结论该法可用于脑心清片浸膏的半成品质量控制。【关键词】脑心清片原儿茶酸高效液相色谱法脑心清片是
2、由单味柿叶提取物(以下简称脑心清片浸膏)制成的中成药,经临床验证,对冠心病心绞痛、脑动脉硬化疗效显著,对短暂脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、心肌梗死后遗症等伴有或不伴有高血压、高血压等多种心脑血管疾病有良好的治疗效果,并具有一定的降血压、降血脂作用,长期服用未发现有明显毒副作用[1,2]。脑心清片浸膏中的黄酮类活性成分的含量控制已有文献报道[3]。脑心清片浸膏中的另一个重要活性成分原儿茶酸[4],具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能[1,5],其质量控制是确保脑心清片高效安全的重要指标之一。本文以HPLC法测定脑心清片浸膏中主要活性成分原儿茶
3、酸的含量,为脑心清片浸膏提供更全面的质量控制方法。 1实验材料 脑心清片浸膏(柿叶提取物,由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供);甲醇(色谱纯);原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检验所,批号:110809200503)。 Agilent1100高效液相色谱仪,DADG1315B可见紫外检测器。 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性 色谱柱:依力特C18柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相:乙腈甲醇0.3%H3PO4,按表1进行梯度洗脱;检测波长:260nm;流速:1mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL。理论板数按原儿茶酸计
4、算不低于2500,拖尾因子1.03;对照品溶液主峰与供试品溶液中原儿茶酸峰保留时间的比值均应在0.990;原儿茶酸与其他成分有效分离,分离度大于1.97,见图1。 2.2对照品溶液制备与线性关系考察 精密称取原儿茶酸对照品适量,加甲醇溶解并定容,分别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61.92、30.96、15.48μg/mL的溶液,按“2.1”项色谱条件分别进样10μL各2次,测定峰面积,以峰面积(A)为纵坐标,对照品进样量(m)为横坐标,进行线性回归,得回归方程为A=2508.6m+63.241,r=0.9991 结果表明原儿茶酸进样量在0
5、.1548~2.4768μg的范围内线性关系良好。 表1梯度洗脱溶剂系统(略) Table1Sloventsystem A.原儿茶酸对照品;B.脑心清片浸膏 图1脑心清片浸膏中原儿茶酸HPLC图谱(略) Figure1TheHPLCgraphofprotocatechuicacidinNaoxinqing 2.3供试品溶液制备 精密称取脑心清片浸膏约20mg,加甲醇20mL使其完全溶解后,转入50mL容量瓶,用甲醇定容,制成质量浓度约0.4mg/mL的溶液,0.45μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。 2.4稳定性试验 取原儿茶酸对照品(质
6、量浓度为61.92μg/mL)甲醇溶液,分别在0、1、2、4、6、8、12、24h进样10μL,测定其峰面积。结果原儿茶酸的平均峰面积为2021.5,RSD值为1.36%。 取脑心清片浸膏样品(批号C6A002),按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液,分别测定原儿茶酸含量,结果原儿茶酸含量的RSD值为2.16%。 2.7回收率试验 取同一批已测定含量的脑心清片浸膏的供试品6份,每份约20mg,分别精密加入200.82μg/mL原儿茶酸对照品甲醇溶液4.5mL(相当于20mg浸膏所含原儿茶酸的量),按“2.3”项下方法制备,测定峰面积,计算原儿茶酸含量和
7、回收率,结果平均回收率为97.36%,RSD为1.21%,见表2。 表2原儿茶酸的回收率试验结果(略) Table2TheRecoveriesofprotocatechuicacidinHPLCassay 2.8样品测定 分别按“2.3”项方法制备3批脑心清片浸膏的供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果批号C6A001、C6A002、C7A001的样品中原儿茶酸的含量分别为44.5、45.9、44.7μg/mg。 3讨论 目前已报道的柿叶有机酸化合物有原儿茶酸、琥珀酸和糠酸等多种有机酸成分[1,4]。原儿茶酸具有抗氧化、清除自由基和
8、神经元保护
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