hplc法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量论文

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1、HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量论文王少妹罗杰利幼梁敬仪贝伟剑【摘要】目的建立脑心清片浸膏中原儿茶酸含量的测定方法。方法采用HPLC方法，色谱柱为依力特C18柱(5μm,250mm×4.6mm)，以乙腈甲醇0.3%H3PO4为流动相进行梯度洗脱，检测波长：260nm，流速：1mL/min，柱温：30℃。结果回归方程为A=2508.6m+63.241，r=0.9991，线性范围为0.1548～2.4768μg；平均回收率为97.36%.freel,250mm×4.6mm)；流动相:乙腈甲醇0.3%H3PO4，按表1进行梯度洗脱；检测波长：260nm；流速：1mL

2、/min；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按原儿茶酸计算不低于2500，拖尾因子1.03；对照品溶液主峰与供试品溶液中原儿茶酸峰保留时间的比值均应在0.990；原儿茶酸与其他成分有效分离,分离度大于1.97,见图1。2.2对照品溶液制备与线性关系考察精密称取原儿茶酸对照品适量，加甲醇溶解并定容，分别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61.92、30.96、15.48μg/mL的溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样10μL各2次，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，对照品进样量(m)为横坐标，进行线性回归,得回归方程为A=2508.6m+63.241，r=0.9

3、991结果表明原儿茶酸进样量在0.1548～2.4768μg的范围内线性关系良好。表1梯度洗脱溶剂系统（略）Table1SloventsystemA.原儿茶酸对照品;B.脑心清片浸膏图1脑心清片浸膏中原儿茶酸HPLC图谱（略）Figure1TheHPLCgraphofprotocatechuicacidinNaoxinqing2．3供试品溶液制备精密称取脑心清片浸膏约20mg，加甲醇20mL使其完全溶解后,转入50mL容量瓶,用甲醇定容，制成质量浓度约0.4mg/mL的溶液，0.45μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。2．4稳定性试验取原儿茶酸对照品(质量浓度为61.92μg/m

4、L)甲醇溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12、24h进样10μL，测定其峰面积。结果原儿茶酸的平均峰面积为2021.5，RSD值为1.36%。2．5精密度试验取原儿茶酸对照品溶液(质量浓度为61.92μg/mL)，重复进样6次,测定原儿茶酸的峰面积，得平均峰面积为2038.6，RSD值为0.98%。2.6重复性试验取脑心清片浸膏样品（批号C6A002）,.freelg，分别精密加入200.82μg/mL原儿茶酸对照品甲醇溶液4.5mL（相当于20mg浸膏所含原儿茶酸的量），按“2.3”项下方法制备，测定峰面积，计算原儿茶酸含量和回收率，结果平均回收率为97.36%,RSD为

5、1.21%，见表2。表2原儿茶酸的回收率试验结果（略）Table2TheRecoveriesofprotocatechuicacidinHPLCassay2.8样品测定分别按“2.3”项方法制备3批脑心清片浸膏的供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果批号C6A001、C6A002、C7A001的样品中原儿茶酸的含量分别为44.5、45.9、44.7μg/mg。3讨论目前已报道的柿叶有机酸化合物有原儿茶酸、琥珀酸和糠酸等多种有机酸成分［1,4］。原儿茶酸具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能［1,5］,是脑心清片浸膏中的一个重要活性成分。本文将HPLC法运用于脑心清

6、片浸膏的原儿茶酸含量测定,结果表明方法可靠、可行，为脑心清片的半成品质量控制提供了一个新途径。【