HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量.doc

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1、HPLC法测定脑心清片浸膏中原儿茶酸的含量作者：王少妹罗杰利幼梁敬仪贝伟剑【摘要】目的建立脑心清片浸膏中原儿茶酸含量的测定方法。方法采用HPLC方法，色谱柱为依力特C18柱(5μm,250mm×4.6mm)，以乙腈甲醇0.3%H3PO4为流动相进行梯度洗脱，检测波长：260nm，流速：1mL/min，柱温：30℃。结果回归方程为A=2508.6m+63.241，r=0.9991，线性范围为0.1548～2.4768μg；平均回收率为97.36%，RSD为1.21％。结论该法可用于脑心清片浸膏的半成品质量控制。【关键词】脑心清片原儿茶酸高效液相色谱

2、法脑心清片是由单味柿叶提取物(以下简称脑心清片浸膏)制成的中成药，经临床验证，对冠心病心绞痛、脑动脉硬化疗效显著，对短暂脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、心肌梗死后遗症等伴有或不伴有高血压、高血压等多种心脑血管疾病有良好的治疗效果，并具有一定的降血压、降血脂作用，长期服用未发现有明显毒副作用［1,2］。脑心清片浸膏中的黄酮类活性成分的含量控制已有文献报道［3］。脑心清片浸膏中的另一个重要活性成分原儿茶酸［4］，具有抗氧化、清除自由基和神经元保护等功能［1,5］，其质量控制是确保脑心清片高效安全的重要指标之一。本文以HPLC法测定脑心清

3、片浸膏中主要活性成分原儿茶酸的含量，为脑心清片浸膏提供更全面的质量控制方法。　　1实验材料　　脑心清片浸膏（柿叶提取物,由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供)；甲醇（色谱纯）；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检验所，批号：110809200503)。　　Agilent1100高效液相色谱仪，DADG1315B可见紫外检测器。　　2方法与结果　　2.1色谱条件与系统适用性　　色谱柱：依力特C18柱(5μm,250mm×4.6mm)；流动相:乙腈甲醇0.3%H3PO4，按表1进行梯度洗脱；检测波长：260nm；流速：1mL/min；柱温：30℃

4、；进样量：10μL。理论板数按原儿茶酸计算不低于2500，拖尾因子1.03；对照品溶液主峰与供试品溶液中原儿茶酸峰保留时间的比值均应在0.990；原儿茶酸与其他成分有效分离,分离度大于1.97,见图1。　　2.2对照品溶液制备与线性关系考察3　　　　精密称取原儿茶酸对照品适量，加甲醇溶解并定容，分别配制各含原儿茶酸247.68、123.84、61.92、30.96、15.48μg/mL的溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样10μL各2次，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，对照品进样量(m)为横坐标，进行线性回归,得回归方程为A=2508.6m+63

5、.241，r=0.9991　　结果表明原儿茶酸进样量在0.1548～2.4768μg的范围内线性关系良好。　　表1梯度洗脱溶剂系统（略）　　Table1Sloventsystem　　A.原儿茶酸对照品;B.脑心清片浸膏　　图1脑心清片浸膏中原儿茶酸HPLC图谱（略）　　Figure1TheHPLCgraphofprotocatechuicacidinNaoxinqing　　2．3供试品溶液制备　　　　精密称取脑心清片浸膏约20mg，加甲醇20mL使其完全溶解后,转入50mL容量瓶,用甲醇定容，制成质量浓度约0.4mg/mL的溶液，0.45μm微孔滤膜

6、过滤,作为供试品溶液。　　2．4稳定性试验　　　　取原儿茶酸对照品(质量浓度为61.92μg/mL)甲醇溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12、24h进样10μL，测定其峰面积。结果原儿茶酸的平均峰面积为2021.5，RSD值为1.36%。　　2．5精密度试验　　　　取原儿茶酸对照品溶液(质量浓度为61.92μg/mL)，重复进样6次,测定原儿茶酸的峰面积，得平均峰面积为2038.6，RSD值为0.98%。　　2.6重复性试验　　　　取脑心清片浸膏样品（批号C6A002）,按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，分别测定原儿茶酸含量，结果原儿茶酸含

7、量的RSD值为2.16%。　　2.7回收率试验　　　　取同一批已测定含量的脑心清片浸膏的供试品6份，每份约20mg，分别精密加入200.82μg/mL原儿茶酸对照品甲醇溶液4.5mL（相当于20mg浸膏所含原儿茶酸的量），按“2.3”3项下方法制备，测定峰面积，计算原儿茶酸含量和回收率，结果平均回收率为97.36%,RSD为1.21%，见表2。　　表2原儿茶酸的回收率试验结果（略）　　Table2TheRecoveriesofprotocatechuicacidinHPLCassay　　2.8样品测定　　　　分别按“2.3”项方法制备3批脑心清片浸膏

8、的供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果批号C6A001、C6A002、C7A001的样品中原儿