高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量

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1、高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量南劲松孙海涛吴艳丽高波【摘要】　　目的采用高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量。方法采用乙腈－0.2%磷酸溶液（4∶96）作为流动相。检测波长为260nm，测定补血调经片中原儿茶酸的含量。结果标准曲线线性范围为0.0165～0.165μg，r=0.99999；平均回收率为99.56%，RSD%＝0.39%。结论该实验方法线性关系良好、简便、准确、专属性强，可作为补血调经片控制原药材和药品的质量方法。【关键词】补血调经片；高效液相色谱法；原儿茶酸　　Abstract：

2、ObjectiveToestablishaqualitycontrolmethodofBuxueTiaojingTablets.MethodsTheHPLCsystemofaAlltimaHPC18（4.6mmID×250mm,5μm）ixtureofacetonitrile-2%phosphoricacid(95∶5,volumeratio)asthemobilephase.Thedetection.ResultsProtocatechuicacidshoethodissimple,accurateandexclu

3、siveanditcanbeusedforthequalitycontrolofBuxueTiaojingTablets.　　Keyg）；MettlerAE-160电子分析天平（准确：0.1mg；MettlerAG-135电子分析天平（准确度：0.01mg）；HS10260D型超声清洗器。原儿茶酸对照品（批号：110809－200102）由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为优级纯，水为超纯水。　　2方法与结果〔1～3〕　　2.1测定波长的选择用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400nm波长范

4、围进行扫描，结果在260nm波长处具有最大吸收。故选择260nm作为测定波长。　　2.2对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成每毫升含16μg的溶液，即得。　　2.3样品提取方法的考察　　2.3.1醋酸乙酯提取法精密称取本品2g，加入0.2%盐酸1ml湿润，加入醋酸乙酯50ml，称定重量，超声提取（250in，放置至室温，加醋酸乙酯补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液25ml，蒸干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至25ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3.2甲醇溶液提取法精密称取本

5、品2g，加入50%甲醇溶液50ml，称定重量，超声提取（250in，放置至室温，加50%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。　　结果，醋酸乙酯提取法提取产物较甲醇提取法所提的产物的色谱峰分离清晰，用二极管阵列检测器检测，醋酸乙酯提取法所提产物的峰纯度高，三点法相似度在0.999以上，故采用选择方法醋酸乙酯提取法。　　2.4供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，精密称取2g，按“2.3.1”方法提取原儿茶酸提取液样品。　　2.5色谱条件色谱柱为AlltimaHPC18（250mm×4.6mm，5μ

6、m）；流动相为乙腈－0.2%磷酸（4:96）；柱温40℃；流速0.7ml/min；测定波长260nm。进样量10μl。对照品、供试品溶液与鸡血藤药材提取液的色谱图如图1～3。　　供试品溶液理论踏板数为14601，结合本法具体情况，暂定其理论板数按原儿茶酸峰计算，应不得低于5000。　　2.6阴性对照实验为进一步考察实验设计的合理性，按原处方工艺制成不含鸡血藤的阴性对照样品，按“2.5”项下方法测定，阴性对照样品如图4。由图4可以看出阴性对照色谱中，原儿茶酸峰位置无干扰峰，证明本法是合理可行的。　　2.7标准曲线的绘制

7、取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成16μg/ml的溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，10μl进样，HPLC测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。曲线回归方程为Y=6368.46X-5.59（r=0.99999）。表明进样量在0.0165～0.165μg内，呈良好的线性关系。　　图1原儿茶酸对照品液相色谱图（略）　　图2供试品液相色谱图（略）　　图3鸡血藤药材液相色谱图（略）　　图4阴性对照液相色谱图（略）　　2.8方法学考察　　2.8.1精密度实验取同一供试品溶液10μl，连续进样5次。结果

8、见表1。结果表明，方法具良好的精密性。　　表1精密度实验结果（略）　　表2稳定性实验结果（略）　　2.8.2稳定性实验取同一供试品溶液10μl，分别在0，2.5，6，9，12h，照“2.5”项下方法测定峰面积，结果如表2。由表2可以看出，峰面积RSD为0.68%，表明峰面积变化很小，原儿茶酸在12h内基本稳定。　　2.8.3重复性实验取同一供试