hplc法测定不同产地的鸡血藤中原儿茶酸的含量

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1、HPLC法测定不同产地的鸡血藤中原儿茶酸的含量【摘要】目的建立鸡血藤的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定了原儿茶酸的含量，C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2），流速1.0ml/min，检测波长260nm。结果原儿茶酸与样品中其他组分分离效果较好，原儿茶酸在31.1～93.3μg范围具有良好线性关系，相关系数r=0.9996；平均回收率为99.49%,RSD为1.58%（n=6）。结论采用此法测定鸡血藤中原儿茶酸的含量，准确可靠，可用于该药材的质量控制。【关键词】鸡血藤原儿茶酸高效液相色谱法【Abstrac

2、t】ObjectiveToestablishthemethodofdetemtemineforSpatholobussuberectusDunn.MethodsHPLCmethodinationofprotocatechuicacidinSpatholobussuberectusDunn.TheseparationedonC18columnethylalcohol-obilephaseL/min.Thedetection.ResultsAsatisfactoryseparationbetpurity31.1～93.3μg，r=0.9996；Theaveragereco

3、veryethodrminationofconstituentsforSpatholobussuberectusDunn.【Keyonsil（TM）钻石C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；LIBRORAEL-160型万分之一电子分析天平；DS-250A（功率）型超声清洗仪。原儿茶酸对照品（批号：809－200102）购自中国药品生物制品检定所；鸡血藤药材产自广西、云南、贵州，由贵州大学生物与科学学院生物系关平教授鉴定为SpatholobussuberectusDunn的干燥根茎。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件用十八烷

4、基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2）为流动相；检测波长为260nm。理论塔板数按原儿茶酸峰计算应不低于3000。对照品与样品色谱图见图1。2.2对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加酸性水（100ml水中加1mol/L的HCL0.5ml）制成每1ml含3μg的溶液，即得。2.3供试品溶液制备取本品细粉1g，精密称定，加水回流2次，每次20ml，滤过，合并滤液并浓缩至约2ml，加入甲醇10ml，滤过，滤液挥干，再加入乙酸乙酯20ml和1mol/L的盐酸0.5ml，超声30min，滤过，滤液挥干，残渣加20ml酸性水（100ml水中加1m

5、ol/L的HCL0.5ml）超声5min使溶解，滤过，滤液过微孔滤膜，作为药材供试品。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，以外标法计算含量。见图1、图2。2．4线性关系考察精密量取原儿茶酸对照溶液配制成1、2、3、4、5μg/ml，分别取10μl注入高效液相色谱仪，进行原儿茶酸含量测定，以原儿茶酸峰面积A对原儿茶酸浓度C进行线性回归，线性回归方程：A=46033C－289.75，线性范围：0.01～0.05μg，相关系数r=0.9996。根据实验结果，原儿茶酸在0.01～0.05μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线

6、性关系。2.5精密度考察取同一对照品，分别重复进样6次，测定结果，对照品溶液中原儿茶酸RSD=0.50%（n=6）。2.6重复性试验取本品6份，精密称定样品，按【样品含量测定】项下的方法操作，制成供试品溶液，测定原儿茶酸的平均含量为57.48μg/g，RSD为1.76%。2.7稳定性试验将供试品溶液在室温下贮存，于0、2、4、6、8h测定，结果样品溶液在8h内稳定，RSD为1.77%。图1原儿茶酸对照品HPLC色谱图图2样品HPLC色谱图2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品共6份，分别加入等量原儿茶酸对照品，照供试品方法制备，测定含量，原儿茶酸平均回收率为98.

7、32%,RSD=1.64%（n=6），结果见表1。表1原儿茶酸回收率实验结果2.9不同产地鸡血藤中原儿茶酸的含量测定按2.3项下方法,制备供试品溶液,测定3个产地鸡血藤药材中原儿茶酸的含量,测定结果见表2。3讨论3．1原儿茶酸属有机酸，极性较大，选择反相色谱法，流动相选择甲醇：水（15：85）的体系，出峰时间较长，且峰形较宽；选用甲醇：水（25：75）的体系，出峰时间适中，峰形仍较宽；故选用甲醇：水：冰乙酸（25：75：0.2）的体系，出峰时间约为9min，峰形尖锐，理论板数达到3000以上，达到分离要求。表2不同产地鸡血藤中原儿茶酸的3．2鸡血藤粉