aeg―1、p16、ki―67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义

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1、AEG—1、P16、Kl一67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义［摘要］目的:探讨AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义。方法：2008年2月至2015年9月选择在我院诊治的宫颈癌前病变患者98例作为癌前病变组，同期选择宫颈癌患者98例作为宫颈癌组和98例健康体检人作为对照组，取三组的宫颈样本都进行AEG-1、P16、KT-67蛋白表达的免疫组化分析，并调查了临床资料进行相关性分析。结果:AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌组的阳性表达率分别为80.0%、93.9%和92.9%,而癌前病变组为5

2、7.1%、50.0%和57.1%,在对照组为3.1%、2.0%和4.1%,三组间对比差异有统计学意义(P［关键词］AEG-1;P16;KI-67；宫颈癌前病变；相关性宫颈癌是女性最为常见恶性肿瘤之一，我国当前宫颈癌的发生率逐渐增高，且呈现年轻化趋势。宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)为常见的宫颈癌前病变，不过发展为宫颈癌的时间比较长，一般在15年左右，在这个时间段可以对宫颈上皮内瘤变进行有效诊断，从而预防宫颈癌的发生。星型胶质细胞上调基因-1(Astrocyteelevate

3、dgene-1,AEG-1)与肿瘤的侵袭转移，血管生成及化疗耐药密切相关，可能是多种肿瘤的一个重要的潜在预后指标。原发肿瘤因子-16(prematuretumor-16,P16)基因为一种细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，可直接参与细胞周期调控，在宫颈癌及癌前病变中pl6基因主要表现为过表达。细胞增殖核抗原一67(nuclear-associatedantigenKT-67)可能是??DNA复制提供场所的核基质及染色体支架的一种组分，可以用来识别生长期的正常细胞和肿瘤细胞，可参不驱动细胞周期的调控网络。肿瘤恶性程度越高，KT-67蛋

4、白表达水平越高，肿瘤细胞增殖越快。本文具体探讨了AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义，现报道如下。1.资料与方法1.1研究对象2008年2月至2015年9月选择在我院诊治的宫颈癌前病变患者98例作为癌前病变组，同期选择宫颈癌忠者98例作为宫颈癌组和98例健康体检人作为对照组，纳入标准：年龄20〜70岁；癌前病变与宫颈癌都得到病理证实；均未行放疗、化疗及免疫治疗；知情同意本研究且得到医院伦理委员会的批准。排除标准：有免疫缺陷疾病；既往有宫颈病变史。癌前病变组中年龄最小35岁，最大68岁，平均年龄（61.

5、34土4.52）岁；平均体重指数为（21.47±2.44）kg/m2；疾病类型：CINI型40例，CINII型40例，CINIII型18例。宫颈癌组中年龄最小42岁，最大69岁，平均年龄（60.67±3.18）岁；平均体重指数（21.22±3.19）kg/m2；病理类型：鳞癌58例，腺癌40例；临床分期：I期44例，II期30例，III期24例。而对照组中年龄最小22岁，最大68岁，平均年龄（45.67±4.19）岁；平均体重指数为（21.89±2.22）kg/m2o1.2免疫组化方法鼠抗人AEG-1单克隆抗体（即用型抗体，批号T

6、A803710）购自R&D公司，鼠抗人P16单克隆抗体（即用型抗体，批号ZM-0205）购自博士得生物有限公司，鼠抗人KT-67单克隆抗体（即用型抗体，批号ST-0910）购自福建迈新生物技术有限公司。DAB显色试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司（生产批号为20942244），免疫组化染色试剂盒购自于北京中杉金桥生物技术有限公司（生产批号为20134461）。采用Envision二步法检测AEG-1、P16、KT-67蛋白的表达情况，在免疫组化过程中，选择经HE染色证实的宫颈组织石蜡块，3um石蜡切片，放置于载玻片，60°C烤片4

7、h;切片经二甲苯脱蜡2次，依次梯度酒精后充分水洗；进行微波处理修复抗原，蒸馏水冲洗，5minX3次；滴加50uL3%H2O2溶液处理15min,以阻断内源性迪氧化物酶，PBS冲洗，5minX3次；滴加50uL第一抗体（AEG-1、P16、KT-67）工作液，4°C孵育12h，PBS冲洗，5minX3次；滴加50txL第二抗体工作液，25°C孵育30min，PBS冲洗，5minX3次；DAB（3，3-二氨基联苯胺Tris缓冲液）室温下3〜5min显色，自来水冲洗终止显色；苏木素复染细胞核1〜2min，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树

8、胶封片、显微镜下观察。以已知的阳性对照染色片为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。1.3观察指标以细胞核内呈现棕黄色颗粒为阳性，每张切片在400倍光学显微镜计数癌细胞，阳性率＞20%定为阳性每张切片由两位病理专家独立阅片共同协商出判断结果。1.4统