四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究.doc

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1、四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究作者：叶国荣，舒建昌，何雅军，吕霞【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法［四氯化碳mL(用花生油1:6稀释)/次，每周3次，共14周］制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)含量;ELISA法检测转化生因子31(T

2、GF01)、肿瘤坏死子(TNFa);化学法检测血清氧化亚氮(NO)。肝组织行HE和Masson胶原染色，光镜下观察病理学改变，并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子BB(PDGFBB)的变化，专业图像分析软件进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较，模型组血清ALT、AST、HA、LN、PCIII、NO、TGFM、TNFa明显升高(P【关键词】四氯化碳;肝纤维化；细胞因子Abstract：ObjectiveToinvestigatethevariationofc

3、orrelatedcytokinewhentheratmodelsofhepaticfibrosiswereinducedbyectionofcarbontetrintraperitonealinjachloride,andtotherelevantmolecularmechanism.MethodsRatmode1sofhepaticfibrosisweremadebyintraperitonealinjectionofcarbontetrachlorideatmL(dilutedl*6wit

4、hpeanutoil),threetimesaweek,atotalof14weeks.Thenormalanddissolventgroupswerepreparedascontrols.Serumleve1sofALT,AST,HA,LN,PCIIIweredetected；serumlevelsofTGFPlandTNFctweredetectedbyELISAmethod.SerumlevelsofNOweredetectedbychemicalmethod.HEandMassonsta

5、iningwereconductedinhepatictissuestoobservepathologicalvariations.Gradesofhepaticfibrosiswereevaluatedaccordingtosemiquantitativehistologicalscoringsystem(SSSsystem).ImmunohistochemicalstainingwasexecutedfordetectingPDGFBBinliver,andprofessionalsoftw

6、areforimageanalysiswasused.ResuItsCarbontetrachloridecouldincreaseobviouslyserumlevelsofALT,AST,HA,LN,andPCIII(PKeywords：carbontetrachloride；hepaticfibrosis；cytokine肝纤维化(hepaticfibrosis)是肝脏对各种慢性损伤的一种修复反应，其特征是以胶原为主的细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)在肝内过多沉

7、积。在肝纤维化的发生发展过程中，一系列的细胞因子被激活，在疾病的进程中发挥重要的作用。常见的细胞因子有转化生因子3(TGF0)、血小板源生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子(TNFa)、表皮生长因子(EGF)与ROS(过氧化氢、超氧游离基)等。研究表明，相关细胞因子的表达，可以引起肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)活化，促进肝纤维化的发生发展［1］。四氯化碳(CC14)腹腔注射是制作肝纤维化模型的经典方法，在前期的系列研究中曾多次采用该方法成功地建立大鼠肝纤维化模型［2-

8、8］，但有关其作用机制尚未阐明。既往的研究大多数为观察四氯化碳腹腔注射造模的效果，国内少有对其作用机理方面的研究报告。本研究拟观察CC14制作肝纤维化模型时相关细胞因子的变化，初步探讨CC14腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。1实验材料主要药物、试剂CC14,分析纯，天津市北宏试剂厂生产；食用花生油；羧甲基纤维素钠，广州器化医疗设备有限公司进口分装;ALT、AST试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司生产;HA、LN、PCIII放射免疫分析试剂盒，上海海岩医学生物技术中心生产；苏木素、伊红购自美国