四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究论文

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1、四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究论文叶国荣，舒建昌，何雅军，吕霞【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法四氯化碳0.025mL(用花生油1∶6稀释)/次，每周3次，共14周制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组.freelodelsofhepaticfibrosisolecularmechanism.MethodsRatmodelsofhepaticfibrosisadebyintraperitonealinjectionofcarbontetr

2、achlorideat0.025mL(diluted1∶6esaalanddissolventgroupslevelsofALT,AST,HA,LN,PCⅢlevelsofTGFβ1andTNFαethod.SerumlevelsofNOicalmethod.HEandMassonstainingiquantitativehistologicalscoringsystem(SSSsystem).ImmunohistochemicalstainingageanalysislevelsofALT,AST,HA,LN,andPCⅢ(P0.05),.freel

3、alanddissolventgroups.Thescoreofhepaticfibrosisinthemodelgroupincreasedsignificantly(P0.05).CarbontetrachloridecouldincreasetheexpressionofPDGFBB(P0.05).ConclusionThecorrelatedcytokinesodelsofhepaticfibrosisaybeoneofthemolecularmechanismsofhepaticfibrosisinratmodelsinducedbyintraper

4、itonealinjectionofcarbontetrachloride.Keyatrix,ECM)在肝内过多沉积。在肝纤维化的发生发展过程中，一系列的细胞因子被激活，在疾病的进程中发挥重要的作用。常见的细胞因子有转化生因子β(TGFβ)、血小板源生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子(TNFα)、表皮生长因子(EGF)与ROS(过氧化氢、超氧游离基)等。研究表明，相关细胞因子的表达，可以引起肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)活化，促进肝纤维化的发生发展1。四氯化碳(CCl4)腹腔注射是制作肝纤维化模型的经典方法，在前期的系列研究中

5、曾多次采用该方法成功地建立大鼠肝纤维化模型2-8，但有关其作用机制尚未阐明。既往的研究大多数为观察四氯化碳腹腔注射造模的效果，国内少有对其作用机理方面的研究报告。本研究拟观察CCl4制作肝纤维化模型时相关细胞因子的变化，初步探讨CCl4腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。1实验材料1.1主要药物、试剂CCl4，分析纯，天津市北宏试剂厂生产;食用花生油;羧甲基纤维素钠，广州器化医疗设备有限公司进口分装;ALT、AST试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司生产;HA、LN、PCⅢ放射免疫分析试剂盒，上海海岩医学生物技术中心生产;苏木素、伊红购自美国Sigma公司;Ma

6、sson三色胶原试剂盒及即用型SP超敏试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司;NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所;大鼠TGFβ1、TNFαELISA试剂盒及兔抗大鼠PDGFBB多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2动物及实验环境SPF级SD大鼠，雄性，体质量180～230g，由广州中医药大学实验动物中心提供合格证号：SCXK(粤)20030001，粤监证字2005A031。于广东省药物研究所标准SPF实验室(粤监证字2005C125号)进行动物饲养及实验。2方法2.1肝纤维化模型的建立腹腔注射CCl40.025mL(用花生油1∶6稀释)，

7、每周3次，共14周。2.2动物分组与处理30只SD大鼠随机分为模型组、正常对照组、溶剂对照组，每组各10只。模型组予腹腔注射CCl40.025mL(用花生油1∶6稀释)，每周3次，共14周;正常组不予处理;溶剂对照组予腹腔注射花生油(0.15mL/只/次)，每周3次。2.3观察项目与方法14周动物实验结束后，采用股静脉放血法最大量取血，分离血清，-20℃保存待检;留取部分肝组织于4%(φ)中性甲醛溶液固定，部分于-170℃液氮中保存待检。自动生化分析仪检测血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ，血清NO检测参照试剂盒进行，放射免疫方法检测TGFβ1、TNF

8、α;肝组织按常规方法行H