妊娠中期因子在甲状腺癌中的表达

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1、妊娠中期因子在甲状腺癌中的表达【】目的研究妊娠中期因子（mk）在甲状腺癌中的表达及其临床意义。方法应用rtpcr、原位杂交方法对50例人甲状腺癌组织、30例良性肿瘤组织、30例正常口腔组织进行了mkmrna表达的研究。结果rtpcr分析显示mkmrna在甲状腺癌组织表达量远高于良性肿瘤组织（p0.01）。本实验中缩短型mk（tmk）仅表达于癌组织。原位杂交结果显示mk的阳性产物位于癌细胞胞浆中；甲状腺癌组织中mk的表达率明显高于良性肿瘤组织（p0.01）；转移组mk的表达率明显高于未转移组（p0.01）。分类及分期观察

2、，mk表达量随着甲状腺癌分期级别的递增呈上升趋势。结论mkmrna在甲状腺癌组织中高表达，并与疾病的恶性度密切相关；tmk可以作为恶性肿瘤标记物；检测mk对临床疾病诊治方案的确定具有参考价值。【关键词】妊娠中期因子；甲状腺癌；rtpcr；原位杂交expressionandclinicalsignificanceofmidkineinthyroidglandcarcinomaatology，harbinmedicaluniversity,harbin150001,china;2.thesecondhospitalofhar

3、binmedicaluniversitycorrespondingauthor:jiaoxiaohui,email:idkinemrnainthyroidglandcarcinoma.methodsrtpcrandinsituhybridizationtechniquesployedtodetecttheexpressionofmkmrnain50casesofthyroidglandcarcinomasamples,30casesofbenigntissueand30casesofnormaltissue.resu

4、ltsmkmrnaabutnormaltissuesbyrtpcr,italsoshokexpressiononstratedthattmkexpressionainlylaidinthecytoplasmofcancercells,ore,amkexpressionorclassificationandstaging.conclusionmka,andalignancydisease.ourresultsshoinationofmkcouldbeavaluablemarkerfortheclinicaldiagnost

5、icpurposeandtreatmentofthyroidglandcarcinomadisease.keyidkine;thyroidglandcarcinoma;rtpcr;insituhybridization1资料与方法1.1临床资料与标本80例2002~2004年来自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科、附属口腔医院颌面外科临床和病理学诊断明确的组织标本，包括50例甲状腺癌（35例发生淋巴结转移，30例正常口腔组织）、30例良性肿瘤组织。.133229.男48例，女32例，年龄22~75岁，平均年龄55.75岁

6、。所有标本均由临床医师取材保存于液氮中。1.2主要试剂takararnapcrkit(amv)ver.3.0、takarataqtm、trizol（大连宝生物工程有限公司），mkmrna原位杂交检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），正义引物：5′atgcagcaccgaggcttcct3′，反义引物：5′atccaggcttggcgtctagt3′（北京赛百盛公司合成）。1.3方法1.3.1rtpcr取组织50mg采用trizol一步抽提法提取总rna，进行反转录，条件：42℃45min，99℃5min。pc

7、r条件：94℃预变性3min，94℃变性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，共30个循环，72℃延伸10min。pcr产物在含eb的1.5%琼脂糖凝胶上分离、检测。1.3.2原位杂交3μm厚连续切片分别进行he染色和mk原位杂交。操作步骤按照试剂盒说明书进行。细胞质中出现清晰棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。结果以阳性细胞数所占比例表示，光境（×400）下随机选取10个视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数≤5%者为阴性（）,6%~15%者为弱阳性（+），16%~50%者为中强阳性（++），50%者为强

8、阳性（+++）。1.3.3统计学方法计量资料采用ibas图文处理系统分析处理，采用bandleader分析软件扫描分析电泳各条带的光密度值表示目的基因的表达量，同时采用spss10.0检验进行统计学处理。p0.05为差异有统计学意义。2结果2.1rtpcr结果按照设计的引物mk的pcr产物大小不等，有