绵羊卵母细胞论文

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1、绵羊卵母细胞体外成熟培养条件的研宄蔡丽娟，于昊赢，孙晓冬，尹多，李钟淑*（延边大学农学院动物科学系，吉林延吉133000）摘要:本实验比较了不同绵羊卵母细胞的收集方法、不同培养时间、FSH和LH不同添加量对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响，结果显示：应用切割法比抽吸法更适合于绵羊卵母细胞的回收（2.44：1.65）;绵羊卵母细胞的成熟培养适宜吋间为22-24h，培养26-28h吋出现了轻微的过成熟现象;FSH/LH浓度为lOug/ml时更有利于卵母细胞的成熟，以此为延边奶山羊与绵羊构建异种间克隆胚胎提供基础数据。关

2、键词：绵羊；卵母细胞；体外成熟TheStudyofMaturationinVitroCultureConditionsofSheepOocytesCaiLi-juan，YuHao-ying，SunXiao-dong，YinDuo,LiZhong-shu*(DepartmentofAnimalScience，AgriculturalCollegeofYanbianUniversity,Yanji133000,China)Abstract：Theexperimentcomparisontheeffectsofdif

3、ferentsheepoocytecollectionmethod,differentculturetime，differentdosageofFSHandLHonsheepoocyteinvitromaturation，theresultsshowedthat:theapplicationofcuttingmethodismoresuitablethanthesuctionmethodforsheepoocyterecovery(2.44:1.65);Thesuitabletrainingtimeofovin

4、eoocytesmaturationcultureis22-24h，26-28happearedslightovermaturephenomenon;FSH/LHconcentrationoflOug/mlismorebeneficialtothematurationofoocytes.ThisstudyprovidedthebasicdataofconstructingtheinterspeciesclonedembryosofYanbiandairygoatsandsheepKeywords:sheep;o

5、ocytes;invitromaturation二十世纪以来，克隆技术的发展是大家有目共睹的，哺乳动物异种间克隆也越来越受到人们的关注，它对物种的改良、濒危动物的保护等具有十分重要的意义，但是目前异种动物克隆技术的成功率仍然很低，试验屮仍有很多环节需要进一步改进和完善。与同种动物（如,羊-羊）相比，异种动物（如，山羊-绵羊）克隆研宂进行的较少，体系也是很不完善。延边奶山羊是优良的地方品种，体型大、耐粗饲、适应性强、产奶量高、终年以放牧饲养为主，很适合在延边朝鲜族自治州特殊的地理环境下饲养，是洲内人比的主要经济来

6、源之一。但是由于长期以来没有系统的管理制度，选育不当，导致延边奶山羊体型外貌不一、体格不大、体重变轻、产奶性能高低差异显著，泌乳期较短，经济收益不大［1］。为改善这一现状，优化种群，试验将利用克隆技术进行品种改良，但是由于延边奶山羊屠宰量少，且屠宰地点分散,导致卵母细胞不易获得，试验很难进行。但是绵羊的卵母细胞很容易获得，因此试验利用绵羊卵母细胞进行延边奶山羊-绵羊异种间核移植，该技术的应用使试验顺利进行。本文主要介绍优化绵羊卵母细胞体外成熟的培养条件，应用正确的卵巢收集方法，在适宜的培养时间和适宜的激素浓度下

7、，获得最优质的受体细胞，为延边奶山羊与绵羊卵母细胞体外成熟、异种间核移梢和胚胎体外培养等研宄提供基础数据。一、材料和方法1、实验材料绵羊卵巢（取自龙井市屠宰场）2、主要的药品及实验仪器设备2.1主要药品TCM-199、胎牛血清（FBS,杭州四季青）、17p-雌二醇、丙酮酸钠、促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、DMEM粉末、青霉素、链霉素等，试剂及无机盐无特殊说明均为Sigma公司产品。所有药品均在生物超净工作台内配制，除生理盐水用水为三重蒸馏水，其余药品所用水均为去离子水。所有药品均用孔径为25pm的微

8、孔过滤器过滤。（1）采卵液:TCM-199、15mmol/LHepes>0.168mg/mlNaHCO3、2%FBS、9IU/ml肝素钠。调pH至7.2-7.4。0.22um滤膜过滤；用前3小时进行平衡.⑵冲卵液：95%的TCM-199和5%的FBS均匀混合，过滤灭菌。⑶成熟培养液：90%TCM-199、10%FBS、lmg/L17p_雌二醇、0.12g/L丙酮酸钠按比例混匀，过滤灭菌