绵羊卵母细胞内ctsb、ctss和caspase 3基因和蛋白表达及活性变化规律

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文绵羊卵母细胞内CTSB�CTSS和caspase3基因和蛋白表达及活性变化规律学位申请人：刘梦鹤指导教师：田树军教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：2015年5月30日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的

2、任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名签字曰期：年<月^日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：4狗导师签名：签字日期年6月签字曰期：loir年G月1？学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:通讯地址：邮编:分类号：单位代码：10086

3、密级：学号：2012330绵羊卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase3基因和蛋白表达及活性变化规律ThestudyonchangesofgeneandproteinexpressionandactivityofCTSB,CTSSandcaspase3insheepoocytes学位申请人：刘梦鹤指导教师：田树军教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：2015年5月30日绵羊卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase3基因、蛋白表达及活性的研究试验所属项目及资金来源受河北省自然科学基金项目——绵羊幼羔卵丘细胞中CT

4、SB和CTSS基因表达及其对卵母细胞发育能力的影响（C2012204084）、国家教育部科学技术研究重点项目——“羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达动力学研究（211018）”及“十二五”国家科技支撑计划项目子课题——“优质种用羔羊快繁技术研究与应用（2011BAD19B02-6）”资助。1河北农业大学硕士学位（毕业）论文摘要组织蛋白酶B（CTSB）和组织蛋白酶S（CTSS）为存在于溶酶体内的半胱氨酸蛋白酶，在细胞凋亡、卵母细胞成熟和胚胎附植等多种生理活动中发挥着重要作用。caspase3处于caspase级联反应的下游，为细胞凋亡的执行者，其活化作为细胞凋亡早期的

5、标志。研究这三种蛋白酶的活性和表达量在卵母细胞体外成熟过程中变化及与卵母细胞质量和发育能力的相关性，能反应卵母细胞在体外成熟过程中所受到凋亡刺激的强度，同时，研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64对卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase3活性和表达量的影响，则可为提高卵母细胞体外成熟质量和发育能力提供理论依据。对于不同来源（成年绵羊及羔羊）、不同质量的绵羊卵母细胞，利用RT-PCR检测在体外成熟（IVM）过程中CTSB、CTSS和caspase3基因表达量，利用双夹心ELISA对CTSB、CTSS和caspase3蛋白表达量和活性进行检测，结果表明：在IVM24

6、h时，质量正常的卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase3基因、蛋白表达量与活性均低于质量差的卵母细胞（P＜0.05；P＜0.01）。成年绵羊卵母细胞与羔羊卵母细胞相比，在IVM24h时，成年绵羊卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase3基因和蛋白表达量及CTSB活性均低于羔羊卵母细胞（P＜0.05；P＜0.01）。成年绵羊及羔羊的卵母细胞在体外成熟过程中，CTSB、CTSS和caspase3基因表达量的研究结果表明：在成年绵羊卵母细胞内，CTSB基因表达量保持稳定（P＞0.05），成熟液中添加1μmol/LE-64和5μmol/LE-64对CTSB基因

7、表达量无显著影响（P＞0.05），添加10μmol/LE-64则使CTSB基因表达量极显著高于对照组（P＜0.01）；CTSS基因表达量在IVM16h以前一直处于无法被检测到的水平，并且1、5和10μmol/LE-64对CTSS基因表达量均无显著影响（P＞0.05）；caspase3基因表达量呈先降低后升高的趋势（P＜0.05），1μmol/LE-64对caspase3基因表达量无显著影响（P＞0.05），5μmol/LE-64对基因表达起到下调作用（P＜0.05），而10μmol/LE-64提高了卵母细胞内caspase基因表达量（P＜0.05）。对于羔羊卵母

8、细胞，CTSB基因表达量