绵羊体外成熟单卵CTSB和CTSS mRNA及成熟相关基因表达差异分析.pdf

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1、分类号：S垦13：3密级：公珏单位代码：学号：100862008433绵羊体外成熟单卯CTSB和CTSSmRNA及成熟相关基因表达差异分析ExpressionAnalysisofCTSB&CTSSmRNAandMatureRelatedGenesofSingleSheepOocytesduringaurmg一1V7MNl学位申请人：张艳普指导教师：孙树春副教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：≥测签字同期：。√纠年／月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑主垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权泣皇堡塞些盘茎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签

3、名签字日期：们17学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：淼：扬签字同期：钐·川7电话：邮编：日{lIILIIIIILllIlll1111IIIIIIll1111111111Ll{Y1897290基金项目资助本研究受国家教育部科学技术研究重点项目“羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达动力学研究(211018)”及国家科技支撑计划的子课题“羔羊超排技术研究与产业化示范(2008BADB2BIO一3)”研究经费资助。摘要卵母细胞在发生、发育和成熟的过程中，细胞质中积累了大量的蛋白质和mRNA，这些物质不仅为正常的胚胎发育、基因组激活提供良好的物质储备，而且也是胚胎能够获得启动卵裂和分化能

4、力的物质基础。因此，卵母细胞的质量直接影响和决定其受精后早期胚胎发育的命运。但是至今人们对卵母细胞发生、生长发育和成熟的分子机理尚不十分清楚，所以有必要对GV～MII期卵母细胞的基因表达情况进行分析研究。在卵母细胞生长期后，用于受精后支持早期胚胎发育的物质，与哺乳动物典型的体细胞相比，其含量的增加非常显著。生长期完成后，卵母细胞进入减数分裂I期，此时RNA的合成速度下降到测不出的水平，但是卵母细胞已经贮存了足够的rRNA、tRNA、mRNA与核蛋白体，以便在受精后合成蛋白之用。母源mRNA是以不被翻译的形式稳定的贮存在卵母细胞中。本研究利用单卵DDRT-PCR技术对成年绵羊GV期和

5、MII期的卵母细胞mRNA进行了比较，又以绵羊幼羔超排的卵作为存在成熟缺陷、受精率低的负面模型与成年绵羊的卵进行了MII期的mRNA表达差异比较。经过PAGE和银染定性分析，得到差异表达条带，经回收筛选测序，未得到成熟相关差异表达基因。然而，通过利用qPCR检测成年绵羊单卵体外成熟过程中空白对照组和E．64添加组0h(GV)、8h、16h、24h(MII)四个时问点CTSB、CTSS及GAPDH的cDNA数量，得出CTSB及CTSS的mRNA相对数量变化情况。成年绵羊单卵CTSBmRNA的表达数量在体外成熟培养过程中，在不添加E．64的情况下，CTSBmRNA的相对数量在Oh(GV

6、期)、8h、16h一直处于上升趋势，各时间点差异显著，在24h(MII期)降到8h的数量水平。CTSSmRNA的相对数量在8h、16h、24h(Mll期)差异不显著，比0h都有所上升，差异显著。经过E．64处理的试验组，CTSBmRNA的相对数量在oh、8h、16h仍然处于上升趋势，各时间点差异显著，但是24h与16h差异不显著。CTSSmRNA的相对数量按时间递增顺序比较，差异都不显著，然而Oh和16h时的数据差异显著，呈缓式变化。经过E．64处理的试验组，CTSB和CTSS的mRNA相对数量整体较对照组的数量有所降低，差异显著。关键词：绵羊单卵；IVM；DDRT-PCR；qPC

7、R；CTSB；CTSSExpressionAnalysisofCTSS&CTSBmRNAandMatureRelatedGenesofSingleSheepOocytesduringIVMPostgraduate：ZhangYanpuMajor：AnimalGenetics，BreedingandReproductionDirection：EmbryoticprojectTutor：SunShuchunAbstractTheproteinsandmRNAsofoocy