绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达及其对卵母细胞发育能力影响.pdf

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1、6430绵羊卯丘细胞中组织蛋白酶基因表达及其对卯母细胞发育能力影响TheEffectoftheGeneExpressionofCathepsininCumulusCellsoninvitroDevelopmentalCapacityofOocytesfromSheep学位申请人：刘志涛指导教师：田树军教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士．授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑

2、皇堡盛些盘堂或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：勃7巷、南签字日期：弦I＼年孑月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑宴垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：匆1乞南签字日期：≯1

3、年占月1日学位论文作者毕业后去向：工

4、作单位：通讯地址：导师签名：忉杠寸审签字日期：珈，，年6月2日电话：邮编：。。。。_——基金项目资助I

5、IIIIrIIIIIIIIIllI＼1897291本研究受国家教育部科学技术研究重点项目“羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达动力学研究(21018)"及国家科技支撑计划的子课题“羔羊超排技术研究与产业化示范(2008BADB2BlO一3)”经费资助。／，，、、f要本研究利用Real．timePCR方法检测成年绵羊和羔绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)mRNA的表达规律，并研究在成熟液中添加组织蛋白酶抑制剂E．64对组织蛋白酶mRNA的表达及其对卵母细胞受精后胚胎发育能力的影响，结

6、果如下：绵羊卵丘细胞中CTSS、CTSBmRNA的表达水平随着体外成熟时间的延长而逐渐下降，成年绵羊卵丘细胞IVM24h的CTSS、CTSBmRNA表达水平较IVMOh分别下降了2倍和5倍，羔绵羊则分别下降了2倍和6倍。羔绵羊卵丘细胞中CTSS、CTSBmRNA表达水平在成熟各时间点均极显著高于成年绵羊(P<0．01)，羔绵羊卵丘细胞IVMoh的CTSS、CTSBmRNA表达水平分别是成年绵羊的9倍和8倍；羔绵羊卵丘细胞IVM24h的CTSS、CTSBmRNA表达水平分别是成年绵羊的7倍和8倍。成熟液中添加E一64可下调卵丘细胞中CTSS、CTSBmRNA的表达水平，10I_tmol／LE

7、．64组IVM24h的卵丘细胞中CTSS、CTSBmRNA表达水平均较对照组显著性降低(P<0．01)。在成熟液中添加1I-tmol／L、59mol／L、109mol／LE一64组和对照组的成年羊卵母细胞的体外成熟率分别为81．76％、80．54％、83．89％和82．78％，组间差异不显著(P>0．05)；各组卵裂率分别为53．89％、56．58％、55．35％和53．74％，组间差异不显著(尸>0．05)；但59mol／L和101．tmol／LE．64的囊胚发育率(26．82％、30．95％)显著高于对照组和19mol／L组(15．63％、18．23％)(p

8、熟液中添加10l-tmol／LE．64的体外成熟率(52．63％)与对照组(51．67％)无显著差异(胗O．05)，但109mol／LE一64组的卵裂率(14．5％)显著高于对照组(11．2％)(P<0．05)。羔绵羊卵母细胞在体外成熟过程中各时期核相发展进程均较成年绵羊慢，且羔绵羊有一部分卵母细胞始终处于GV期，不能恢复减数分裂。绵羊卵丘细胞在IVM8h扩散不明显，IVM16h时逐渐扩散开，ⅣM24h呈扩散状态。在成熟液中添加109mol／LE．64有利于促进卵丘细胞的扩散。关键词：绵羊；卵丘细胞；卵母细胞；体外发育；组织蛋白酶；E．64TheEffectofthemRNAexpress

9、ionofCathepsininCumulusCellsoninvitroDevelopmentalCapacityofOocytesfromSheepAuthor：LiuZhitaoAdvisor：TianShujunMajor：AnimalGenetics，BreedingandReproductionAbstractThisexperimentwasconductedtostudythemRNAexpression