绵羊磷脂酶c zeta(plcζ)对绵羊卵母细胞的激活作用及早期胚胎发育的影响

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1、I分类号：密级：学号：2013408030单位代码：10759石河子大学硕士学位论文绵羊磷脂酶Czeta(PLCζ)对绵羊卵母细胞的激活作用及早期胚胎发育的影响学位申请人木尔扎提·阿勒腾别克指导教师赛务加甫教授申请学位类别专业硕士专业名称兽医硕士研究领域兽医技术服务所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年11月activationandinfluenceofearlyembryonicdevelopmentofsheepphospholipaseCzeta(PLCζ)ofsheepoocytesADissertationSubmittedt

2、oShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofVeterinaryByMUErzati·Aletengbieke(MasteroftheVeterinaryProfession)DissertationSupervisor:Prof.SaiWujiafuNovember,2015课题来源：国家自然科学基金项目课题名称：绵羊精子提取液中PLCζ对绵羊卵母细胞胞质钙振荡和早期胚胎发育的影响课题编号：31160524学位论文独创性声明本人所呈交

3、的学位论文是在我导据我所知，除师巧指导下进行的研究王作及取得巧研究成果．文中己经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人。对本文的研究己经发表或撰写过巧巧究成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确巧说明并表示谢意．研究生签名一：时间：。年月口日）公／前？Ｉ：同《八使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部口或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校困书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务．有权将学位论文的标题

4、和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定．名＾研究生签名：抓丸矣卡新辕时间：＾化年＂月口曰］少／导师签名：时间：７＾／户年八月／〇曰中文摘要目的：在我国绵羊的用途较多是肉毛兼用的家畜，因此在屠宰过程中会产生大量的卵巢组织。然而在现实生产中绵羊卵巢组织的利用率并不高，利用绵羊卵巢组织生产优质胚胎的技术研究发展缓慢，因而提高卵巢组织的重复利用率生产优质胚胎的技术是进一步要解决的问题。用卵巢组织生产优质胚胎可能主要是受卵母细胞激活效率的影响，当前主要是使用蛋白激酶抑制剂或其他人工激活方法激活卵母细胞。但这种激活方式不能使我们清楚地

5、了解卵母细胞激活的机理，可能会对我们研究卵母细胞的激活机理产生误区，使我们不能确定对后期胚胎的发育是否会产生不利影响。因而，我们需要一种新的生物激活制剂来激活卵母细胞。经研究发现精子中存在一种特异性的激活因子，即磷2+脂酶Czeta（PLCζ）。研究证实它是通过增加卵母细胞胞质内Ca浓度来激活卵母细胞，并且能使早期胚胎正常发育。它的发现将会利于我们更进一步研究卵母细胞的激活机制和早期胚胎的发育，同时大量生产优质胚胎的技术也将会快速发展。在本试验中，初步探究绵羊磷脂酶Czeta(PLCζ)对绵羊卵母细胞的激活作用及早期胚胎发育的影响。方法：(1)对实

6、验室已构建好的重组质粒pEGFP-N1-PLCζ进行菌液PCR、双酶切鉴定，鉴定完成后进行大提重组质粒和空载体。采集绵羊卵巢组织挑选出卵母细胞，将重组质粒和空载体分组显微注射到绵羊MⅡ期卵母细胞，观察卵母细胞的激活情况。（2）培养显微注射重组质粒的卵母细胞22h，然后对其进行荧光钙离子探针Rhod2-AM染色，并用激光共聚焦显微镜对卵母细胞及早期胚胎的发2+育过程中Ca动态变化进行扫描，并设立孤雌激活的卵母细胞为对照组。（3）培养显微注射重组质粒的卵母细胞，观察早期胚胎发育的全过程。结果：(1)鉴定了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ，并将重组质粒

7、pEGFP-N1-PLCζ显微注射到绵羊卵母细胞中，成功激活了卵母细胞使其孤雌发育。(2)用激光共聚焦显微镜采集到卵母细胞及早期胚胎发育2+过程中Ca动态变化。(3)显微注射重组质粒pEGFP-N1-PLCζ绵羊卵母细胞激活后，绵羊卵母细胞正常发育形成早期胚胎。结论:(1)绵羊PLCζ的重组质粒注入MⅡ期卵母细胞可孤雌激活绵羊卵母细胞，并且能发育成正常的2+早期胚胎；(2)绵羊卵母细胞及早期胚胎发育过程中有Ca动态变化。2+关键词：磷脂酶Czeta；孤雌激活；Ca振荡；早期胚胎发育IAbstractObjective:Inourcountrythe

8、sheepmeatwooliswidelyusedinlivestock,resultinginalargenumbero