发育微环境对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响

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1、浙江大学博士学位论文发育微环境对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响姓名：舒静申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：黄荷凤20120531浙江大学博士学位论文中文摘要超促排卵对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响浙江大学医学院妇产科学2008级博士研究生舒静导师黄荷凤教授中文摘要第一部分超促排卵对卵母细胞和早期胚胎线粒体的影响目的：线粒体是供应能量、调节钙稳态的重要细胞器，也是唯一能遗传DNA的细胞器，与卵子和胚胎发育潜能相关。在卵母细胞成熟过程中，线粒体发生数量、形态分布和功能的一系列变化。超促排卵使卵巢超越生理调控同步发育多个卵子，其干预阶段正

2、是卵母细胞胞质成熟、线粒体储备完善的阶段。多项研究提示超促排卵可以改变卵巢微环境，获得的卵子质量下降，因此超促排卵应用的安全性值得探讨。本项目通过小鼠模型，对比超促排卵和非超促排卵卵子体外受精后发育潜能，同时检测卵子和早期胚胎线粒体的数目、形态、功能、线粒体DNA(m“ochondrialDNA，mtDNA)的异质性以及卵巢组织的氧化损伤和抗氧化能力，以探讨超促排卵时卵巢环境改变对卵母细胞线粒体的影响以及与发育潜能的关系。方法：采用C57BL／6J小鼠，注射孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素(h啪锄chorionicgonadotrop

3、ill，HCG)为超促排卵组，自然动情期注射HCG为对照组。收集两组所获得的卵子和体外受精后所获的胚胎。采用实时PCR法检测单卵／胚胎mtDNA拷贝数、荧光素酶法检测单卵／胚胎ATP、Jc．1染色检测线粒体膜电位(Mitochon嘶almembraIlepotemial，△、l，m)、MitoTrackerRed染色观察线粒体分布、电镜观察线粒体超微结构以及用变性高效液相色谱法检测mtDNA的异质性。对比两组间的卵子成熟度、胚胎发育状况、线粒体各指标的差异以及卵巢组TTT浙江大学博士学位论文中文摘要织的氧化损伤产物和总抗氧化能力的差异。结果

4、：1．与对照组相比，超促排卵组取卵成功率高(尸

5、(P<0．01)，获得的2细胞胚胎和囊胚的△甲m与对照组差异无显著性。5．电镜显示超促排卵组获得的部分MII卵线粒体稀少，MitoTmckerRed荧光染色显示超促排卵组MII卵线粒体分布极性聚集比例高于对照组(P

6、过程中被淘汰。超促排卵获得的囊胚其线粒体数量、功能与对照组无显著差异．3．单次超促排卵与对照组相比不显著增加卵子mtDNAD．100p区的突变频率。关键词：超促排卵、卵母细胞、胚胎、线粒体、IntDNA、线粒体膜电位Ⅳ浙江大学博士学位论文中文摘要第二部分子宫内膜异位症腹腔液对早期胚胎线粒体的影响目的：子宫内膜异位症(内异)与不孕存在很强的相关性。轻度盆腔内异患者没有输卵管和卵巢的解剖异常但也常伴有不孕。内异是炎症性和免疫性疾病。内异腹腔液含有炎症因子、活性氧和活性氮，能抑制胚胎发育，但机制未明。线粒体是胚胎发育潜能的重要决定因素，对环境极其

7、敏感，是炎症因子和各种自由基作用的靶细胞器，易受损而诱发细胞凋亡。本研究通过分析轻度内异不孕患者助孕治疗的临床资料、其腹腔液一氧化氮(ni仃icoxide，NO)的含量以及腹腔液对小鼠胚胎线粒体的影响，来探讨轻度内异盆腔微环境对早期胚胎的影响，寻求其相关不孕的最佳处理方式。方法：对腹腔镜探查证实为轻度内异患者进行术后随访，与输卵管性不孕组对比，分析两组体外受精．胚胎移植(砌1，打rD蠡milization．emb巧otraIIlsfer’IVF．ET)治疗的临床特征。同时收集腹腔液检测其NO代谢物的含量，用含不同浓度硝普钠(sodi啪ni缸

8、-opmsside，sNP，是No的供体)的培养液孵育鼠胚，观察NO对早期胚胎发育的影响。将腹腔液按10％比例掺入培养液进行鼠胚培养，计算鼠胚卵裂率和囊胚形成率，同时用实时PCR