绵羊卵母细胞的差异蛋白质组学研究

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1、中国兽医科学２０１１，４１（１１）：１１９３－１１９７ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ中图分类号：Ｓ８５２．２文献标志码：Ａ文章编号：１６７３－４６９６（２０１１）１１－１１９３－０５绵羊卵母细胞的差异蛋白质组学研究林雍峰，张勇，李鸿岩，胡俊杰，赵兴绪＊（甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州７３００７０）摘要：为了研究绵羊卵母细胞成熟过程中蛋白质的表达模式，以期在蛋白质水平探索绵羊卵母细胞成熟的分子机制，将采用双向凝胶电泳技术获得的２－ＤＥ图谱经ＰＤＱｕｅｓｔ８．０分析并找出差异蛋白斑点后，

2、对差异蛋白斑点进行高效液相色谱串联离子阱质谱分析。结果显示，ＧＶ期和ＭⅡ期卵母细胞２－ＤＥ图谱之间存在１３个表达差异明显的蛋白斑点；４个蛋白斑点的质谱检测结果较为理想，对应３种不同的蛋白质，分别为截短的ＶＰ２、苹果酸脱氢酶、谷胱甘肽转移酶Ｍ３；其中截短的ＶＰ２、苹果酸脱氢酶在卵母细胞成熟过程中表达量下调，谷胱甘肽转移酶Ｍ３在卵母细胞中大量表达并且表达量上调。结果表明，绵羊卵母细胞成熟过程中，细胞的ｍＲＮＡ合成和表达水平以及糖代谢水平可能降低，细胞的抗氧化和解毒能力可能提高。关键词：绵羊；卵母细胞；双向电

3、泳；差异蛋白质组学ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍａｔｕｒｅａｎｄｉｍｍａｔｕｒｅｏｖｉｎｅｏｏｃｙｔｅｓｐｒｏｔｅｉｎｓＬＩＮＹｏｎｇ－ｆｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ，ＬＩＨｏｎｇ－ｙａｎ，ＨＵＪｕｎ－ｊｉｅ，ＺＨＡＯＸｉｎｇ－ｘｕ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆ

4、ｏｖｉｎｅｏｏｃｙｔｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｏｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｏｖｉｎｅｏｏｃｙｔｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，２－ＤＥｍａｐｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｒｏｕｇｈＰＤＱｕｅｓｔ８．０．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｐｏｔｓｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｔｈｅＨＰＬＣｃｏｕｐ

5、ｌｅｄｗｉｔｈｉｏｎｔｒａｐｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒｓｙｓｔｅｍ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｇｅｌｓｉｎ－ｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ１３ｐｒｏｔｅｉｎｓｐｏｔｓａｐｐｅａｒｅｄｔｏｂｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＧＶａｎｄＭⅡｓｔａｇｅ．Ｆｏｕｒｓｐｏｔｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｈｉｃｈｗｅｒｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄｔｏ３ｕｎｉｑｕｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｒｕｎｃａｔｅｄＶＰ２，ｍａｌａｔｅｄｅｈｙ－ｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ａｎｄｇｌｕｔａｔ

6、ｈｉｏｎｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＭ３．ＴｒｕｎｃａｔｅｄＶＰ２ａｎｄｍａｌａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｗｅｒｅｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｄｕｒｉｎｇｏｏｃｙｔｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＭ３ｗａｓａｂｕｎｄａｎｔｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｏｖｉｎｅｏｏｃｙｔｅｓａｎｄｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．ＴｈｅｓｔｕｄｙｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍＲＮＡａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆｇｌｕｃｏｓｅｍｅ－ｔａｂｏｌｉｓ

7、ｍｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｄｕｒｉｎｇｏｖｉｎｅｏｏｃｙｔｅｓｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ｂｕｔｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄｄｅｔｏｘｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｈｅｅｐ；ｏｏｃｙｔｅ；ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ卵母细胞充分生长后便停滞于减数分裂前期，不同亚型同时存在和翻译后修饰的信息。因此，利即生发泡（ＧＶ）时期。ＧＶ期卵母细胞首先要经过

8、用蛋白质组学方法从整体水平对卵母细胞成熟过程生发泡破裂（ＧＶＢＤ）后才能完成减数分裂并停滞于中蛋白质的组成和变化进行研究，已成为研究卵母第二次减数分裂中期（ＭⅡ），成为成熟的卵母细胞。细胞分子机制的一个新的突破口。本试验采用双向卵母细胞中蛋白质的组成和表达是非常复杂的，没电泳（２－ＤＥ）技术，建立了绵羊ＧＶ期和ＭⅡ期卵母有可靠的关于ｍＲＮＡ水平和蛋白质表达量的线性细胞蛋白质表达图谱，并找出表达量明显发生变化［１－２］关系，并且基因组研究不能