欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:21943437
大小:65.05 KB
页数:8页
时间:2018-10-25
《基于gctofms研究威灵仙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠血清代谢谱的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、基于GCTOFMS研究威灵仙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠血清代谢谱的影响[摘要]观察威灵仙总皂苷(TSCR)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清代谢谱的变化,探讨其治疗AA可能的作用机制。采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,观察大鼠的组织病理学变化。利用气相色谱飞行时间质谱(GCTOFMS)结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLSDA),对正常组、AA模型组和TSCR组3组之间的代谢谱进行分析,通过变量重要性投影(VIP)〉1结合Pl,P1材料与方法11试药与仪器弗氏完全佐剂(Freund’scompleteadjuvant)购自Sigma公司;甲
2、醇(批号20130129)购自国药集团化学试剂有限公司;其他试剂均为分析纯;威灵仙总皂苷,经UV及UPLC检测,纯度92%以上,购自陕西宝鸡宣威生物技术有限公司。GC色谱仪(Agilent7890A,Agilent,USA);Rxi5SilMS毛细管柱(250umX30m,025umRestek,USA);质谱仪(LECOChromaTOFPEGASUS4D,LECO,USA);GL20A全自动冷冻高速离心机(湖南仪器仪表总厂离心机厂);-80°C超低温冰箱(日本三洋公司)。12动物SD级雄性大鼠24只,体重(220±20)g,由安徽医科大学实验动物
3、中心提供,许可证号SCXK(皖)2011002。室温18〜22°C,相对湿度40%〜60%,动物自由进食、饮水。13AA模型的建立和给药实验动物按体重随机分为3组,每组8只,分别为正常组(Normal)、模型组(Model)和威灵仙总皂苷组(TSCR),除正常组外,每只大鼠于右后足趾皮内注射Freund's完全佐剂01mL。正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积的生理盐水,TSCR组灌胃威灵仙总皂苷,剂量为100mg•kg_l•d-1,每天1次,连续16d。14组织病理学检查麻醉大鼠,取完整大鼠左后足(非致炎侧)踝关节,置于10%中性甲醛固定,经常规脱钙、
4、脱水、透明、石蜡包埋、切片、HE染色后,光镜下观察各组大鼠踝关节病理组织学变化。15血清样品采集和处理各组大鼠均于末次给药后2h,麻醉,腹主动脉取血,3000r•min-1离心10min,取上清液冷冻保存至-80°C待用。分析前将血清样品于37°(3解冻,解冻后取100PL血清,加035mL甲醇,涡旋混匀,12000r•min-1离心15min,取上清液,于2mL进样瓶(甲烷硅基化)中。在真空浓缩器中干燥提取物35°C,15h;向干燥后的代谢物加入60uL甲氧胺盐试剂,混匀后,放入烘箱中80°C孵育20min;向每个样品中迅速加入80uLBSTFA(
5、含有1%TCMS),将混合物70°C孵育1h;冷却至室温,向混合的样本中加入10uLFAMES(饱和脂肪酸甲酯标准混合液,溶于氯仿C8C161g•L-l;C18C3005g-L-1);混匀,上机检测。16色谱和质谱条件气相色谱飞行时间质谱联用仪配有Rxi5SilMS柱,GCTOFMS具体分析条件如下:进样量1uL,不分流模式;载气氦气;前进样口吹扫流速3mL•min-1;柱流速ImL•柱温50°C保持1min,以每分钟10°C的速率上升至330°C,保持5min;前进样口温度280°C;传输线温度280°C;离子源温度250°C;电离电压-70eV;
6、扫描方式m/z30〜600;扫描速率20spectrum•s-1;溶剂延迟366s。17代谢组学数据处理数据处理使用的是LECO公司的ChromaT0F43X软件和LECOFiehnRtx5数据库,主要用于原始峰识别,过滤噪音和校正基线,峰对齐,谱图去卷积解析,峰定性和定量。将共有的峰导入DEMO(UmetricsAB,Umea,Sweden)软件,经归一化处理后,对其进行主成分分析(principalcomponentanalysis,PCA),再用偏最小二乘法判另1J分析(partialleastsquaresdiscriminantanalys
7、is,PLSDA)进行外部模型验证,最后再结合VIP,筛选出潜在的生物标志物。采用SPSS190软件进行统计学处理,2组间比较采用t检验,检验标志性代谢物组间差异的显著性,P23潜在生物标志物的鉴定通过PLSDA分析后,结合变量重要性投影值(variableimportanceprojection,VIP)及P肌醇是精氨酸和脯氨酸代谢产物,可以直接清除氧自由基,与氧化应激有关[22]。模型组中肌醇水平升高,表明AA的发病机制可能受精氨酸和脯氨酸代谢的影响。脯氨酸是合成人体蛋白质的重要氨基酸之一,反式4羟基L脯氨酸是脯氨酸代谢的中间产物,与能量代谢有关
8、,同时有抗氧化作用,文献报道[23],脯氨酸代谢与RA密切相关,其代谢异常会影响柠檬酸循环,降低炎性反应状态
此文档下载收益归作者所有